Name: Désorption/ionisation laser assistée par matrice guidée par fluorescence avec spectrométrie de masse de postionisation induite par laser de cellules neurales de rat individuelles (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Découvrez la spectrométrie de masse MALDI-2 à cellule unique guidée par fluorescence pour profiler les lipides neuronaux de rat. Cette méthode haut débit révèle l'hétérogénéité cellulaire et lie les profils moléculaires à l'identité cellulaire.

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<ol><li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+lipids+and+cell+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Membrane lipids and cell signaling.</a> Curr Opin Lipidol. 28 (5), 408-413 (2017).</li>
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<li>Cheng, K. W., Su, P. R., Feller, K. J. A., Chien, M. P., Hsu, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+Metabolic+Heterogeneity+of+Cancer+Cells+Using+Functional+Single-Cell+Selection+and+nLC+Combined+with+Multinozzle+Emitter+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Investigating the Metabolic Heterogeneity of Cancer Cells Using Functional Single-Cell Selection and nLC Combined with Multinozzle Emitter Mass Spectrometry.</a> Anal Chem. 96 (2), 624-629 (2024).</li>
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<li>Soltwisch, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometry+imaging+with+laser-induced+postionization%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometry imaging with laser-induced postionization.</a> Science. 348 (6231), 211-215 (2015).</li>
<li>Barré, F. P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Sensitivity+Using+MALDI+Imaging+Coupled+with+Laser+Postionization+%28MALDI-2%29+for+Pharmaceutical+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Enhanced Sensitivity Using MALDI Imaging Coupled with Laser Postionization (MALDI-2) for Pharmaceutical Research.</a> Anal Chem. 91 (16), 10840-10848 (2019).</li>
<li>McKinnon, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI-2-Enabled+Oversampling+for+the+Mass+Spectrometry+Imaging+of+Metabolites+at+Single-Cell+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spec%22%5BJournal%5D)">MALDI-2-Enabled Oversampling for the Mass Spectrometry Imaging of Metabolites at Single-Cell Resolution.</a> J Am Soc Mass Spec. 35 (11), 2729-2742 (2024).</li>
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<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardiac+Perfusion+of+the+Mouse+for+Brain+Tissue+Dissection+and+Fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transcardiac Perfusion of the Mouse for Brain Tissue Dissection and Fixation.</a> Bio Protoc. 11 (5), e3988(2021).</li>
<li>Aboghazleh, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+brain+extraction+and+dissection%3A+A+comprehensive+approach%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Rodent brain extraction and dissection: A comprehensive approach.</a> MethodsX. 12, 102516(2024).</li>
<li>Jager, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+enzymatic+and+mechanical+methods+of+dissociation+on+neural+progenitor+cells+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of enzymatic and mechanical methods of dissociation on neural progenitor cells derived from induced pluripotent stem cells.</a> Adv Med Sci. 61 (1), 78-84 (2016).</li>
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<li>Castro, D. C., Xie, Y. R., Rubakhin, S. S., Romanova, E. V., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-guided+MALDI+mass+spectrometry+for+high-throughput+single-organelle+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Image-guided MALDI mass spectrometry for high-throughput single-organelle characterization.</a> Nat Methods. 18 (10), 1233-1238 (2021).</li>
<li>Castro, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Cell+and+Subcellular+Analysis+Using+Ultrahigh+Resolution+21+T+MALDI+FTICR+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Single-Cell and Subcellular Analysis Using Ultrahigh Resolution 21 T MALDI FTICR Mass Spectrometry.</a> Anal Chem. 95 (17), 6980-6988 (2023).</li>
<li>Ibáñez, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometry-based+metabolomics+of+single+yeast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometry-based metabolomics of single yeast cells.</a> Proc Natl Acad Sci. 110 (22), 8790-8794 (2013).</li>
<li>Krestensen, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Profiling+of+Glioblastoma+Patient-Derived+Single+Cells+Using+Combined+MALDI-MSI+and+MALDI-IHC%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular Profiling of Glioblastoma Patient-Derived Single Cells Using Combined MALDI-MSI and MALDI-IHC.</a> Anal Chem. 97 (7), 3846-3854 (2025).</li>
<li>Niehaus, M., Soltwisch, J., Belov, M. E., Dreisewerd, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission-mode+MALDI-2+mass+spectrometry+imaging+of+cells+and+tissues+at+subcellular+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Transmission-mode MALDI-2 mass spectrometry imaging of cells and tissues at subcellular resolution.</a> Nat Methods. 16 (9), 925-931 (2019).</li>
<li>Xie, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Data-Driven+and+Machine+Learning-Based+Framework+for+Image-Guided+Single-Cell+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Data-Driven and Machine Learning-Based Framework for Image-Guided Single-Cell Mass Spectrometry.</a> J Proteome Res. 22 (2), 491-500 (2023).</li>
<li>Luu, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TIMSCONVERT%3A+a+workflow+to+convert+trapped+ion+mobility+data+to+open+data+formats%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">TIMSCONVERT: a workflow to convert trapped ion mobility data to open data formats.</a> Bioinformatics. 38 (16), 4046-4047 (2022).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>2',5'-dihydroxyacétophénone</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D107603</td> DHAP, acétate d’ammonium <td>d’une pureté de 97 %</td></tr><tr><td></td> Réactif <td>238074</td> ACS <td>Sigma Aldrich</td><td>, &ge ; 97 %</td></tr> <tr><td>Axio M2 Imager</td><td>Zeiss</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Poinçon de biopsie, 2 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-399</td><td>integra miltex poinçon de biopsie standard, 2 mm</td></tr><tr><td>Chlorure de calcium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C4901</td><td>anhydre, poudre &ge ; 97 %</td></tr> <tr><td>Centrifugeuse Eppendorf</td><td>Sigma Aldrich</td><td>EP5405000441</td><td>centrifugeuse 5425 avec rotor FA-24x2</td></tr><tr><td>Gentamicine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G1272</td><td>liquide, BioReagent</td></tr><tr><td>Stylo de gravure en verre</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z225568</td><td>temps de carbure, paquet de 1</td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7893</td><td>Réactif ACS, &ge ; 99.5 %</td></tr><tr><td>HEPES tampon</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3375</td><td>&ge ; 99,5 % (titrage)</td></tr><tr><td>Hoechst 33258 Solution</td><td>Sigma Aldrich</td><td>94403</td><td>1 mg/mL dans H2O, &ge ; 98,0 % (HPLC)</td></tr><tr><td>Filtre HEPA en ligne</td><td>Sigma Aldrich</td><td>WHA67225001</td><td>VACU-GUARD Disque de 60 mm, boîtier PFTE de 0,45</td></tr><tr><td>Lames de microscopie revêtues d’ITO Delta</td><td>Technologies</td><td>CG-90IN-S115</td><td>70-100&Omega ; résistance</td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M8266</td><td>anhydre, &ge ; 98 %</td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>208094</td><td>anhydre, &ge ; 97 %</td></tr><tr><td>Microtubes à centrifuger</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HS4323K</td><td>capacité du tube 1,5 mL, paquet de 500</td></tr><tr><td>Papain système de dissociation</td><td>Worthington Biochemical&nbsp ;</td><td>LK003150</td><td>une boîte, 5 flacons à usage unique</td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4458</td><td>liquide, BioReagent</td></tr><tr><td>Chlorure de potassium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>529552</td><td>Qualité biologie moléculaire</td></tr><tr><td>Phosphate de potassium monobasique</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5379</td><td>Réactif Plus</td></tr><tr><td>Biocarbonate de sodium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6014</td><td>Réactif ACS, &ge ; 99,7 %</td></tr> <tr><td>Chlorure de sodium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9888</td><td>Réactif ACS, &ge ; Hydroxyde</td></tr> <tr><td>de sodium</td> à 99 % <td>Sigma Aldrich</td><td>221465</td><td>réactif ACS, &ge ; 97 %, pastilles</td></tr><tr><td>Phosphate de sodium dibasique</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9763</td><td>Réactif ACS, &ge ; 99</td></tr><tr><td> %Sublimate</td><td>HTX</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>timsTOF FleX MALDI-2</td><td>Bruker</td><td>N/A</td><td>microGRID</td></tr><tr><td>enabled Tube sous vide&nbsp ;</td><td>Thermo Scientific</td><td>8701-0080</td><td>Nalgene Tube en PVC sans phtalates&nbsp ;</td></tr></tbody></table>

désorption/ionisation laser assistée par matrice guidée par fluorescence avec spectrométrie de masse de postionisation induite par laser de cellules neurales de rat individuelles

Fluorescence-Guided Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization with Laser-Induced Postionization Mass Spectrometry of Individual Rat Neural Cells

La figure 1 présente une vue d’ensemble du flux de travail pour la spectrométrie monocellulaire MALDI-2 guidée par fluorescence. Tout d’abord, le tissu disséqué à partir de régions cérébrales ciblées (Figure 1A) est dissocié en cellules uniques et déposé sur des lames de microscopie conductrices recouvertes d’ITO (Figure 1B). L’emplacement des cellules est déterminé par imagerie par fluorescence sur lame entière (<strong class="xfig...

Désorption/ionisation laser assistée par matrice guidée par fluorescence avec spectrométrie de masse de postionisation induite par laser de cellules neurales de rat individuelles

Single-cell measurements are critical to understanding the rich spatiochemical heterogeneity of the brain. Matrix-assisted laser/desorption ionization ...

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Pharmacothérapie remplacement de la dopamine en utilisant la L-DOPA est le traitement le plus couramment utilisé symptomatique de la maladie de Parkinson, mais il est accompagné par des effets secondaires, y compris des mouvements anormaux involontaires, dyskinésie...

Spectrométrie de masse MALDI Imaging des neuropeptides dans la maladie de Parkinson

Source : Hare, D. J., et.al.  Imagerie des métaux dans le tissu cérébral par ablation laser - plasma à couplage inductif - spectrométrie de masse (LA-ICP-MS). J. Vis. Exp. (2017)Cette vidéo montre l’utilisation de la spectrométrie de masse à plasma à couplage inductif par ablation laser (LA-ICP-MS) pour visualiser et quantifier les distributions de métaux dans le tissu cérébral de souris. Le protocole implique l’ablation laser pour générer un aérosol de particules d’échantillon, l’ionisation...

Spectrométrie de masse plasma-plasma couplée par ablation laser inductive pour visualiser les métaux dans le tissu cérébral de souris

Nous décrivons comment utiliser la microdissection par capture laser (LCM) pour obtenir des populations enrichies de neurones de l'hippocampe ou des neurones simples de coupes congelées de cerveau de rat blessé pour l'analyse d'expression génique ultérieure à l'aide quantitative PCR en temps réel et / ou puces à ADN du génome entier.

Microdissection par capture laser de populations enrichies de neurones neurones isolés ou pour l&#39;analyse d&#39;expression génique après un traumatisme crânien

Cellules neuroprogenitor humaines (CNP) ont été élargis dans des conditions de prolifération. NPC ont été différenciées en cultures de neurones riches en présence d'une combinaison de neurotrophines. Marqueurs neuronaux ont été détectés par immunofluorescence. Pour isoler une population pure de neurones, les PNJ ont été différenciés sur des lames de membrane PEN et microdissection laser a été effectuée.

Microdissection laser de neurones à partir de cellules différenciées Neuroprogenitor humaines en culture

Ce protocole décrit la conception et l’implantation chirurgicale d’un mécanisme de retenue de la tête pour surveiller l’activité neuronale dans les structures cérébrales sous-corticales chez des rats alertes.  Il décrit des procédures permettant d’isoler des neurones uniques dans la configuration juxtacellulaire et d’identifier efficacement leurs emplacements anatomiques.

Suivi juxtacellulaire et localisation des neurones unique au sein de structures cérébrales sous-corticales d&#39;alerte, Head-Rats retenu

L'isolement des neurones dopaminergiques individuels ou l'aire tegmentale ventrale par immunohistochimie directe ou indirecte est démontrée en utilisant microdissection laser. Les paramètres pour l'isolement d'un tissu à partir d'une lame de verre en utilisant un laser infrarouge et de diapositives membrane en utilisant la combinaison d'un laser infrarouge et ultraviolet sont discutés.

Microdissection laser - une démonstration de l&#39;isolement de la dopamine neurones individuels et de l&#39;Espace ventrale tegmentale entière

Gene analyse de l'expression d'un sous-ensemble de cellules dans un tissu spécifique représente un défi majeur. Cet article décrit comment isoler l'ARN total de haute qualité à partir d'une population de cellules spécifiques en combinant une méthode de immunomarquage rapide avec microdissection laser.

Isolement de l&#39;ARN à partir de sous-populations cellulaires spécifiques en utilisant le laser capture microdissection Combiné avec Rapid immunomarquage

L’objectif de ce protocole est d’utiliser la technique de tri cellulaire activé par fluorescence (FACS) pour trier des types spécifiques de cellules neurales en vue d’une analyse ultérieure de l’expression génique spécifique au type de cellule, des marqueurs épigénétiques et/ou de l’expression des protéines.

Utilisation du tri cellulaire activé par fluorescence pour examiner l’expression génique spécifique d’un type de cellule dans le tissu cérébral du rat

Nous décrivons une technique d'étiqueter les neurones et leurs processus via antérograde ou rétrograde traceurs injections dans les noyaux du cerveau en utilisant une préparation in vitro. Nous avons modifié une méthode existante de i n vitro traceur électroporation en profitant de marqué par fluorescence mutants de souris et de l'équipement optique de base afin d'augmenter la précision de l'étiquetage.

Neuronal Tracing dans des explants de cerveau à guidage laser

Un protocole pour la sublimation de la matrice DAN sur le tissu cérébral du rat pour la détection des gangliosides à l’aide de la spectrométrie de masse d’imagerie MALDI est présenté.

Sublimation de DAN Matrice pour la détection et la visualisation des gangliosides dans Rat Tissue Brain MALDI Imaging Mass Spectrometry

Ce protocole explique comment collecter des neurones uniques, des microglies et des astrocytes du noyau central de l’amygdale avec une grande précision et une spécificité anatomique à l’aide de la microdissection de capture laser. En outre, nous expliquons notre utilisation de microfluidique RT-qPCR pour mesurer un sous-ensemble du transcriptome de ces cellules.

Combiner la microdissection de capture laser et le QPCR microfluidique pour analyser les profils transcriptionnels des cellules uniques : une approche de biologie des systèmes à la dépendance aux opioïdes

Découvrez la spectrométrie de masse MALDI-2 à cellule unique guidée par fluorescence pour profiler les lipides neuronaux de rat. Cette méthode haut débit révèle l'hétérogénéité cellulaire et lie les profils moléculaires à l'identité cellulaire.

Désorption/ionisation laser assistée par matrice guidée par fluorescence avec spectrométrie de masse de postionisation induite par laser de cellules neurales de rat individuelles (Vidéo) | JoVE Journal

Désorption/ionisation laser assistée par matrice guidée par fluorescence avec spectrométrie de masse de postionisation induite par laser de cellules neurales de rat individuelles

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