הפרדה מבוססת כרומטוגרפיה בשכבה דקה של נוקלאוטידים (p)ppGpp מבודדים מחיידקים המושרים על ידי מתח

התחל עם תמציות נוקלאוטידים עם תווית רדיו המתקבלות מתרבית חיידקים לפני ואחרי השראת מתח.

תחת לחץ, אנזימים חיידקיים ממירים גואנוזין טריפוספט וגואנוזין דיפוספט לנוקלאוטידים המושרים על ידי מתח גואנוזין פנטפוספט וגואנוסין טטרה-פוספט.

אתר את התמציות על צלחת כרומטוגרפיה בשכבה דקה המצופה מראש בפולימר קטיוני כשלב הנייח.

הנח את הצלחת בתא המכיל מאגר כשלב הנייד, וודא שהנוזל נשאר מתחת למקום כדי למנוע דיפוזיה מוקדמת.

אפשר למאגר לעלות על ידי פעולה נימית, תוך הפרדת הנוקלאוטידים הטעונים שלילית לרצועות נפרדות על סמך המטען והגודל שלהם.

לאחר הפיתוח, הסר את הצלחת, יבש באוויר וחתוך את החלק העליון כדי לחסל איזוטופים חופשיים ולהפחית את אות הרקע.

חשוף את הצלחת למסך רגיש לקרינה כדי לזהות את האות הרדיואקטיבי.

רמות מוגברות של גואנוזין טטרה-פוספט וגואנוזין פנטפוספט לאחר השראת מתח חושפות תזוזות דינמיות במאגר הנוקלאוטידים של גואנוזין.

ראשית, קבעו לוחית TLC תאית PEI בגודל 20 על 20 סנטימטר.

השתמש במספריים כדי להסיר את חמשת הסנטימטרים העליונים, והשתמש בעיפרון רך כדי לסמן קו מקור סנטימטר אחד מהקצה. מרחו טיפה של חמישה מיקרוליטר מכל דגימה על משטח ה-PEI.

לפני שהנקודה יכולה להתייבש, העבירו את הצלחת למיכל המכיל שכבה של 1.5 מונופוטסיום פוספט מולארי רדוד מספיק כדי לא לגעת בנקודת דגימת המקור. מכסים את המיכל באטם אטום, ומאפשרים עלייה נוזלית לראש היריעה הגזומה בגודל 15 סנטימטרים. לאחר מכן, הסר את הכרומטוגרמה המפותחת במלואה וייבש אותה באוויר בטמפרטורת החדר.

חותכים וזורקים את החלק העליון של הכרומטוגרמה המכיל את ה-P32 החופשי לפסולת רדיואקטיבית. השתמש במסך זרחן כדי לחשוף את הסרטים האודיו-רדיוגרפיים למשך הלילה. למחרת, פתח את הסרט והשתמש בהדמיית זרחן כדי ללכוד ולכמת את האות הירוק של הזרחן.

לאחר מכן, השתמש בתוכנת ImageJ כדי לכמת את הכתמים הרדיואקטיביים.