טרנספורמציה גנטית בינארית חיידקית מבוססת וקטור כרומוזום מלאכותי בצמחי Arabidopsis: טכניקה ליצירת צמחים טרנסגניים עם החדרת עותק יחיד
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:09 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צמחי Arabidopsis הנושאים ראשי פרחים לא בשלים. טבלו את ראשי הפרחים בתרחיף תאי Agrobacterium הנושאים T-DNA משובט עם כרומוזום מלאכותי חיידקי בינארי או BIBAC, וקטור המשתכפל הן במערכות E. coli והן במערכות Agrobacterium. וקטור בינארי T-DNA זה יכול לספק טרנסגנים גדולים כגון גן עמידות לקוטלי עשבים וסמנים פלואורסצנטיים הניתנים לבחירה לאורך מקדם ספציפי לזרע.
בזמן שראשי הפרחים עדיין שקועים, ערבבו בעדינות את הצמחים כדי לשפר את המגע שלהם עם אגרובקטריום. עם יכולתו הטבועה להדביק צמחים, אגרובקטריום מעביר את הטרנסגן לתא הפרחים. כאשר הטרנסגן נכנס לתא, הוא עובר לגרעין ומתמזג עם גנום הצמח.
כעת, עטפו את הצמח בניילון נצמד ודגרו בחושך כדי לשמור על לחות לשיפור השינוי. הסר את הסרט וגדל צמחים בתנאים פיזיולוגיים עד שהם מייצרים זרעים.
לאחר מכן, קצרו את הזרעים והתבוננו במיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לבחור טרנספורמציה. כעת, גדלו את הזרעים שעברו טרנספורמציה בתנאים מתאימים עד לנביטה. מרססים את הצמחים בקוטל עשבים, ודוגרים.
צמחים עם החדרת טרנסגנים מרובים חווים השתקת גנים וקמלים, בעוד שצמחים עם החדרת עותק יחיד מבטאים אנזים פעיל לחילוף חומרים של קוטלי עשבים ושורדים את הטיפול. חלץ DNA גנומי מהטרנספורמנטים ששרדו ובצע PCR כדי לחשב את היעילות של החדרת עותק בודד.
כדי להכין את צמחי הארבידופסיס לטרנספורמציה, יש לגדל צמח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים