בדיקת אלקטרוכימילומינסנציה לכימות רמות חלבון המטרה בליזט במוח

לזיהוי כמותי של חלבון ספציפי בליזאט מוח עכבר באמצעות האלקטרוכימילומינסנציה, ECL, בדיקה חיסונית, התחל עם לוחית בדיקה מרובת בארות.

הבארות מורכבות מאלקטרודות עבודה מוליכות ונגד, המשלימות את המעגל החשמלי. שכבה דיאלקטרית מפרידה בין האלקטרודות, ומשפרת את רגישות הבדיקה.

הוסף נוגדנים חד שבטיים ראשוניים של עכבר כנגד חלבון המטרה לבארות. האלקטרודות העובדות, בעלות יכולת קשירה גדולה יותר, מאפשרות לנוגדנים לשתק אותן.

דגירה עם תמיסה המכילה חלבון, נקשרת למשטחי הכריכה הנותרים של הבאר, ומפחיתה את הפרעות הרקע.

הוסף ליזאט שבר גרעיני של מוח העכבר. חלבון המטרה בליזאט נקשר במיוחד לנוגדנים החד-שבטיים.

הוסף נוגדנים רב-שבטיים ללא תווית, המזהים ונקשרים לאפיטופים על החלבון, הקשור לנוגדנים חד-שבטיים ראשוניים על האלקטרודה. הוסף נוגדנים משניים ספציפיים המסומנים בקומפלקס רותניום, הנקשרים לנוגדנים הלא מסומנים. הוסף חוצץ מתאים המכיל פעילי שטח - המספק סביבת ייצור ECL מתאימה - וטריפרופילמין, TPA.

הנח את הצלחת מרובת הבארות במערכת זיהוי ה-ECL. עם הפעלת הפוטנציאל על פני האלקטרודות, קומפלקס הרותניום הקשור לנוגדנים מתחמצן. במקביל, ה-TPA מתחמצן ומאבד באופן ספונטני פרוטון.

רדיקל ה-TPA שנוצר מפחית את קומפלקס הרותניום המחומצן למצבו הנרגש. עם הרפיה למצב הקרקע שלו, קומפלקס הרותניום פולט פוטון שזוהה על ידי גלאי הפוטו.

עוצמת האור