שיטה מיקרופלואידית מבוססת שבב לניתוח מהיר של כימוטקסיס נויטרופילים באמצעות דם מלא

לדגימת דם מלאה, הוסף קומפלקסים ספציפיים של נוגדנים המכוונים נגד תאי דם למעט נויטרופילים.

הוסף חלקיקים מגנטיים הנקשרים לתאי הדם הקשורים לקומפלקס הנוגדנים.

העבירו את הדגימה המתויגת אימונומגנטית ליציאת טעינת התאים של שבב מיקרופלואידי.

חבר דיסקים מגנטיים ליציאת טעינת התאים.

השדה המגנטי מושך את התאים המתויגים אימונומגנטית, ולוכד אותם לדפנות הצדדיות של הנמל.

הנויטרופילים, בהיותם לא מתויגים, זורמים לתוך השבב ונלכדים באזור עגינת התא.

הוסף תמיסה כימואטרקטיבית עם תווית פלואורסצנטית ומדיום נדידה למאגרים ייעודיים. הנוזלים זורמים דרך התעלות המיקרופלואידיות ויוצרים שיפוע ריכוז.

כאשר החומר הכימואטרקטיבי נקשר לקולטן הנויטרופילים, הוא מעורר שינויים תוך-תאיים, מה שגורם לנויטרופילים לארגן מחדש את השלד הציטולוגי שלהם ולהרחיב פסאודופודים.

פסאודופודים אלה פועלים כרגליים, ומניעים את הנויטרופילים לעבר ריכוזים גבוהים יותר של כימוטקסיס - תהליך הנקרא כימוטקסיס.

השתמש בטכניקות מיקרוסקופיה מתאימות כדי לנטר את נדידת הנויטרופילים בתגובה לשיפוע הכימואטרקנטי.

הסר את המים נטולי היונים מהמכשיר, והוסף 100 מיקרוליטר תמיסת פיברונקטין מהשקע. המתן שלוש דקות כדי לוודא שכל התעלות מלאות בתמיסת פיברונקטין. לאחר מכן, דגרו את המכשיר בצלחת פטרי מכוסה למשך שעה בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, הסר את תמיסת הפיברונקטין מהמכשיר, והוסף 100 מיקרוליטר של מדיום הגירה מהשקע. שוב, המתן שלוש דקות כדי לוודא שכל הערוצים מלאים באמצעי ההעברה. דגרו את המכשיר למשך שעה נוספת בטמפרטורת החדר, לפני השימוש במכשיר בניסוי הכימוטקסיס. הכניסו 10 מיקרוליטר דם מלא לתוך שפופרת של 1.5 מיליליטר. לאחר מכן, הוסף 2 מיקרוליטר מקוקטייל הנוגדנים בשני מיקרוליטרים של חלקיקים מגנטיים מערכת בידוד נויטרופילים, וערבב בעדינות את הצינור על מנת לתייג מגנטית את התאים המתויגים בנוגדנים. דגרו על תערובת התווית למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, חבר שני דיסקים מגנטיים קטנים לשני הצדדים של יציאת טעינת התאים של המכשיר. שאפו את המדיום מכל יציאות המכשיר. לאחר מכן, פיפטה לאט שני מיקרוליטרים מתערובת הדם המסומנת לתוך המכשיר המיקרופלואידי מיציאת טעינת התאים. הנח את המכשיר המיקרופלואידי על שלב המיקרוסקופ מבוקר הטמפרטורה ב-37 מעלות צלזיוס. המתינו מספר דקות עד שמספיק נויטרופילים נלכדים באזור עגינת התאים.

לאחר מכן, הוסף 100 מיקרוליטר של התמיסה הכימואטרקטיבית במדיום נדידה של 100 מיקרוליטר למאגרי הכניסה המיועדים להם, באמצעות שני פיפטורים. זה ייצור שיפוע כימואטרקטיבי על ידי ערבוב כימי מבוסס זרימה למינרית מתמשכת. החומר הכימואטרקטיבי יכול להיות חלבונים רקומביננטיים, כגון FMLP, או דגימות קליניות, כגון סופרנטנט של ליחה מחולים עם COPD.

לאחר שהזרימה התייצבה, רכוש תמונות פלואורסצנטיות של שיפוע הדקסטרן FITC בערוץ. לאחר מכן, דגרו את המכשיר בשלב המיקרוסקופ מבוקר הטמפרטורה, או בחממת תרבית תאים קונבנציונלית למשך 15 דקות. לאחר הדגירה, דמיין את ערוץ השיפוע, תוך שימוש במטרה פי 10 כדי לתעד את המיקומים הסופיים של התא לניתוח נתונים.