ניתוח הקשר האנטיגני בין וירוסים באמצעות בדיקת מיקרונטרול מבוססת תמונה

הוסף מדיה ואנטיסרה שטופלה באנזים הורסי קולטנים מדוללים סדרתית על חד-שכבות של תאי יונקים, ומונעים קשירת וירוסים לא ספציפית.

הוסף תרחיף לנגיף השפעת. נוגדנים אנטיסרה, ספציפיים לחלבונים נגיפיים, נקשרים, מנטרלים וירוסים ומונעים כניסת תאים.

ריכוז נוגדנים מנטרל נמוך או נוגדנים לא מנטרלים מאפשרים קשירת אנטיגן נגיפי לא יעילה, ומאפשרים היצמדות לנגיף לקולטני התאים.

השלך מדיה. מרחו מדיה המכילה תאית, ויוצרים כיסוי מוצק למחצה.

הנגיף משתמש במנגנון התא המארח כדי ליצור חלקיקים נגיפיים ולגרום לליזה של תאים.

שכבת העל מגבילה את תנועת הנגיף, מקלה על זיהום מקומי ויוצרת חורים בשכבות התאים החד-שכבתיות.

הסר את הכיסוי. תקן וחלחל תאים.

לשטוף עם חיץ. הוסף נוגדנים הקושרים אנטיגנים נגיפיים בתוך תאים חדירים.

נוגדנים משניים מצומדים לחזרת פרוקסידאז הנקשרים לנוגדנים ראשוניים.

הכנס מצעי פרוקסידאז ומי חמצן, וכתוצאה מכך מוצר כחול.

בארות תמונה לכימות אוכלוסיות תאים נגועות בנגיף כנגד דילול אנטי-סרום.

זהה דילולים אנטיסריים המצביעים על ירידה מוגדרת באוכלוסיית תאים נגועים כדי לקבוע טיטר נטרול.

כדי לבצע נטרול נגיפים, הכינו את שכבת התא יומיים-שלושה מראש, ואז הוסיפו 50 מיקרוליטר VGM לכל באר בצלחת. השתמש בעמודות 11 ו-12 לבקרת וירוסים ובקרת תאים, בהתאמה. הוסף 50 מיקרוליטר של דילול של 1 ל-20 של אנזים הורס קולטנים או סרום שטופל ב-RDE לשורה הראשונה של עמודות 1 עד 10.

בצע דילול טורי כפול על ידי העברת 50 מיקרוליטר משורה A לשורה H, והשלכת 50 מיקרוליטר משורה H. לאחר מכן, הוסף 50 מיקרוליטר של מדלל לכל באר בעמודת הבקרה של התא. הוסף 50 מיקרוליטר של הנגיף לכל באר בצלחת למעט עמודת הבקרה של התא. דגרו את הצלחת בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים-שלוש. לאחר מכן, הסר את החיסון והוסף את הכיסוי לכל באר. דגרו את הצלחת למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ללא הפרעה. לאחר מכן, תקן והכתים את הצלחות.

כדי לכמת את הנטרול, הנח לוחית באר באזור הסריקה של סורק שטוח. סרוק את הצלחת והפעל את תוכנת קורא לוחות הבאר כדי לחשב את הטיטר הנגיפי הנדרש.