אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:21 דק׳ • July 8th, 2025
קח שקופית מיקרו-מערך המכילה פפטידים של היסטון עם שינויים לאחר תרגום מטרה ולא מטרה או PTMs.
הפפטידים משותקים באמצעות ביוטין מצומד בנקודות ספציפיות בשקופית הזכוכית המתפקדת על ידי סטרפטווידין.
הכתמים מכילים גם פלואורופור ירוק מצומד ביוטין, המקל על זיהוי הכתמים.
הציגו חוצץ חוסם, המונע אינטראקציה לא ספציפית של נוגדנים.
הסר את המאגר והצנטריפוגה לייבוש השקופית.
בתוך חותם שעווה, תחם את המערך בשעווה.
איזון המערך עם מאגר הכלאה.
דגירה עם הנוגדנים העיקריים הספציפיים ל-PTM מטרה.
הכנס נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור אדומים הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
הסר נוגדנים וצנטריפוגה לא קשורים לייבוש השקופית.
דמיין את השקופית באמצעות סורק מיקרו-מערך. הקרינה הירוקה עוזרת לזהות את הכתמים, בעוד שהפלואורסצנציה האדומה מצביעה על אינטראקציה בין PTM לנוגדנים, ומדגימה את ספציפיות הנוגדנים.
זיהוי ה-PTM המטרה מדגים ספציפיות נוגדנים, בעוד שזיהוי PTMs שאינם מטרה מעיד על תגובתיות צולבת של נוגדנים.
בהנחיית מפת לוחית המקור, טען 1 עד 2 מיקרוליטר מכל תכונת פפטיד לבארות המיועדות של לוח אחד או יותר בנפח קטן של 384 בארות. לדלל כל תכונה פי עשרה עם מאגר הדפסה של מיקרו-מערך חלבון פי 1, בתוספת אלבומין סרום בקר של 1%, ו-5 מיקרוגרם למיקרוליטר ביוטין עם תווית פלואורסצאין. לאחר מכן, צנטריפוגה את הצלחות ב 500 פעמים גרם בטמפרטורת החדר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים