איתור חלבוני פריון חריגים ברקמת המוח באמצעות אימונוהיסטוכימיה

קח שקופית עם קטע קבוע במוח של יונקים המציג אגרגטים של חלבון פריון לא מקופל.

טפל בקטע בחומצה פורמית כדי להפחית את ההדבקה של אגרגטים פריונים.

טפל עם חיץ חומצי בתוך תא לחץ מיובש. חום גבוה ו-pH חומצי שוברים קישורים צולבים של חלבון המושרה על ידי קיבוע, וחושפים את האפיטופים האנטיגניים.

טבלו במי חמצן כדי לנטרל פרוקסידאז אנדוגני, ולמנוע צביעה לא רצויה ברקע.

הניחו את השקופית בצלחת כיסוי והוסיפו חיץ לשמירה על לחות הרקמות.

הציגו תמיסת חסימה, המונעת קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הוסף נוגדן ראשוני ספציפי לאגרגטים של פריון.

הסר את מולקולות הנוגדנים הלא קשורות. הכנס נוגדן משני ביוטינילי שנקשר לנוגדנים הראשוניים.

הסר את מולקולות הנוגדנים הלא קשורות. הוסף אנזים פרוקסידאז ביוטיניל עם קומפלקס עם אבידין שנקשר לביוטין על הנוגדן המשני.

הוסף מצע כרומוגני, אותו הפרוקסידאז מתחמצן למוצר צבעוני.

בעזרת מיקרוסקופ, התבונן באגרגטים המוכתמים.

טבלו בזהירות את חלקי הרקמה בחומצה פורמית 98% בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. שטפו את החלקים במי ברז למשך 5 דקות, ולאחר מכן שטפו פעמיים במים מזוקקים. השתמש במיכל צביעה מנירוסטה בתא הלחץ המלא ב-500 מיליליטר מים מזוקקים כדי לטפל מראש במאגר ציטראט של 10 מילי-מולרי ב-98 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.

למטרות בקרת איכות, הנח קטע של סרט חיווי חיטוי דבק על הסל כדי לפקח על הטמפרטורה והלחץ. לאחר