אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:54 דק׳ • December 23rd, 2025
קח לוחית בדיקה המכילה תערובת של מיקרוספירות פוליסטירן מגנטיות צבועות פנימית בפלואורופורים שונים מבחינה ספקטרלית.
כל קבוצת מיקרוספרה מחוברת קוולנטית לנוגדני לכידה ספציפיים לחיידקים פתוגניים.
הוסף תערובת חיידקים פתוגנית שנהרגה בחום. דגירה.
נוגדנים ללכידה קושרים את האנטיגנים החיידקיים של המטרה, ויוצרים קומפלקסים של חיידקי מיקרוספרה.
השתמש במפריד מגנטי כדי ליישב מתחמים. השליכו חיידקים לא קשורים ושטפו עם חוצץ.
הוסף נוגדנים לזיהוי חוצץ וביוטיניל, הנקשרים במיוחד לחיידקים הקשורים למיקרוספרה.
הפרד מגנטית את המתחמים ושטוף עם חיץ.
השעו מחדש את המתחמים במאגר. מולקולות מדווחות פיפטה המכילות סטרפטווידין מצומד פלואורופור, הנקשרות לנוגדנים לזיהוי ביוטיניל.
הפרד מגנטית ושטוף את המתחמים. השעו מחדש במאגר.
במהלך ניתוח מבוסס זרימה, הלייזר הראשון מעורר את הפלואורופורים הפנימיים של המיקרוספרה, יוצר חתימות ספקטרליות ייחודיות ומזהה קבוצות מיקרוספרה ייחודיות.
הלייזר השני מעורר את מדווחי הפלואורופור הקשורים לחיידקים במיקרוספרות, מכמת חיידקים על קבוצות מיקרוספרות שונות, ומאפשר זיהוי חיידקים כמותי מרובה.
ללכידת דגימה, התחל בהוספת חמישים מיקרוליטר של מיקרוספרות, או חרוזים מצומדים כדי ללכוד נוגדנים לתוך צלחת של 96 בארות. לאחר מכן, הוסיפו חמישים מיקרוליטר של החיידקים הפתוגניים ואחריהם חמישים מיקרוליטר של PBS-TBN
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים