טכניקות לעיני עיבוד מושתלים בתותב רשתית למותאם למקום Histopathological ניתוח: חלק 2 Epiretinal שתלים עם נעצי רשתית
February 14th, 2015
כאן אנו מתארים טכניקות היסטולוגיות להדמיית רקמת עין הסמוכה ישירות למתכת אפירטינלית ותותבת רשתית.
תותבות רשתית עם רכיבי מתכת קשים אינן תואמות לתהליכים היסטולוגיים מסורתיים. כאן אנו מתארים טכניקות להערכת בריאות העין הסמוכה ישירות לשתל רשתית מאובטח עם T מתכת.זה מושג על ידי גרעין וקיבוע העין על פי הפרוטוקול המתואר בסרטון נלווה, ולאחר מכן ניתוח דגימת רקמה, הכוללת את השתל ואת ה-T ברשתית.השלב השני הוא לייבש בהדרגה את דגימת הרקמה ולאחר מכן להטמיע אותה בשרף אפוקסי ב הכיוון הרצוי בתהליך הטמעה דו-שלבי. לאחר מכן, גוש השרף הסופי מותקן במחזיק מיוחד ונטחן בהדרגה עד שנחשף חתך רוחב דרך השתל ורקמת העין שמסביב ברמה הרצויה.
השלב האחרון הוא לצבוע את הרקמה החשופה על פני השטח, ולאחר מכן לצלם ולצלם במיקרוסקופ דיסקציה בעוצמה גבוהה כדי לדמיין את הארכיטקטורה התאית הסמוכה לתותבת המושתלת. שלבים אלה חוזרים על עצמם מספר פעמים לפי הצורך. בסופו של דבר, נאספות סדרה של תמונות חתך דרך דגימת הרקמה, כולל השתל באתר, וניתן להשתמש בהן כדי לחדד את עיצוב המכשיר או הניתוח, כמו גם לסייע בהערכת הבטיחות של התותבת המסוימת.
היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו היסטולוגיה מסורתית של חיתוך מבוסס להב, הוא שחפצים מושתלים בלב, כולל רכיבים מתכתיים, יכולים להישאר באתרם במהלך ההליך, מה שמאפשר הדמיה של ממשק רקמת השתל. שיטה זו יכולה לענות על שאלות מפתח בתחום תותבת הרשתית, כגון הערכת השלמות המבנית של רקמת העין העדינה הסמוכה לתותבת רשתית מושתלת. לאחר כריתת העין וקיבוע כפי שמתואר בסרטון נלווה של JoVE, דמיינו את השתל ואת הנקודה שבה הוא מחובר לחלק החיצוני של העין.
באמצעות להב של 15 מעלות. בצע חתך טרנס קרנית היקפי והסר את מכסה הקרנית כדי לחשוף את החלק הפנימי של גלגל העין. שימו לב שהעדשה הוסרה בעבר במהלך כריתת העדשה, שהיא חלק מההליך הכירורגי של שתל אפירטינלי זה.
לאחר מכן, הכנס את הקשתית ואת כל סיבי ה-Z שנותרו בעדשה כדי לחשוף את החדר האחורי עם השתל האפירטינלי ואת המתכת T באתרה. בהתאם לשתל ולמחקר המבוצע, הסר רכיבים זרים לפני דיסקציה נוספת. בדוגמה הנוכחית, המערך האפירטינלי המוערך מורכב מאב-טיפוס הרמטי, אלקטרודות יהלום וחבילת אלקטרוניקה השוכנת בתוך מנשא סיליקון קונפורמי.
נתח בזהירות דגימה הכוללת את הנעץ והרקמה שמסביב בכיוון הרצוי. השתמש במספריים לדיסקציה עדינה כדי לחתוך רצועות בעובי מלא מהחלק האחורי של העין, כולל סקלרה, כורואיד ורשתית. כאן חלץ בזהירות את חבילת אלקטרודות היהלום על ידי חיתוך עדין עם האזמל.
השאירו את גוף הסיליקון של השתל יחד עם הידוק הרשתית ושאריות חיווט הפלטינה. קח דגימה שנותנת חתך אורך של הנעץ המציג את כל שכבות הרשתית הסמוכות לתקיעה. לאחר מכן החזר את הדגימה ל-70% אתנול.
יבש את הדגימה במשך שלושה ימים בשלבי אתנול מתקדמים. ראשית, יש לייבש את הדגימה באתנול 70% למשך שעתיים, פעמיים. לאחר מכן, ייבשו את הדגימה ב-80% אתנול למשך שעתיים פעמיים, ואז בלילה למחרת ייבשו את הדגימה ב-90% אתנול למשך שעתיים פעמיים, המשיכו לייבש את הדגימה ב-100% אתנול למשך שעתיים פעמיים, ואז למשך הלילה.
לבסוף, יש לייבש את הדגימה ב-100% אצטון למשך שעתיים פעמיים. הסר את הדגימה מהאצטון והתבונן בה תחת מיקרוסקופ אור כשהיא מתייבשת באוויר בטמפרטורת החדר. הוצאת נוזלים מהרקמות הרכות גורמת לקריסת תאים והתכווצות.
הדגימה תועבר לאפוקסי רגע לפני שהיא מתחילה להתכרבל ולהתמוטט. הערכה מתי מתרחשת סלסול וקריסת הרקמה מתפתחת עם הניסיון. כדי להטמיע את הדגימה בשרף אפוקסי שקוף, טבלו את רקמת העין באפוקסי נוזלי במיכל מתאים הניתן לאיטום.
מסירים בעדינות את האפוקסי בתא ואקום ומשאירים אותו למשך הלילה בטמפרטורת החדר לריפוי. הקפד להטמיע את הדגימה בכיוון הרצוי על ידי שינוי גודל האפוקסי והדגימה הנרפא עם מסור פס וקנה הבלוק שהשתנה המכיל את רקמת העין באפוקסי נוזלי טרי כך שהציר הארוך של הנדבק מכוון במקביל לתחתית התבנית. השתמש בנקודה של דבק סופר כדי להדק את דגימת שינוי הגודל לתחתית מחזיק המדגם.
מלאו את מחזיק הדגימה באפוקסי נוזלי ודגז כמו קודם, השאירו לריפוי למשך הלילה. לאחר מכן הרכיבו את השרף במחזיק דגימת שחיקה וטחנו ידנית את הדגימה ב-230 עד 250 סל"ד עם המים באמצעות נייר סיליקון קרביד. לצורך מכתים, טבלו את פני הקרקע בכתם כחול למשך שלוש עד חמש דקות או עד להתפתחות כתם.
לאחר שטיפת הדגימה במי ברז, דמיין את פני הקרקע של הדגימה עם חיתוך בעוצמה גבוהה יותר. היקף. כדי לדמיין את השכבות התאיות של הרשתית, מרחו טיפת מים מזוקקים על המשטח העליון של האפוקסי ממש מעל הדגימה. כדי להחליק את העקיפה בממשק אפוקסי האוויר.
השתמש במקור אור צוואר אווז סיבים אופטיים כדי להאיר את הדגימה. חזור על שלבי הטחינה וההדמיה בכל פעם טחינת עובי מוגדר מראש של דגימה. תוספת הטחינה המינימלית, המדויקת והניתנת לשחזור של מחזיק הדגימה היא 20 מיקרון.
תהליך זה חוזר על עצמו בהדרגה עד שנחשף חתך דרך השתל ורקמת העין שמסביב ברמה הרצויה. המוצג. להלן תמונות לדוגמה של רקמת רשתית המוצגת מיד בסמוך לטיטניום רשתית T בנקודות שונות במהלך תהליך השחזה. התמונות מראות קטעים אורכיים של הנעץ חודרים דרך העין ויוצאים מהסקלרה הצמודה לסיליקון ולרשתית כחולה מוכתמת ולא מוכתמת.
ניתן לראות ניתוק וקיפול רשתית לא מלאכותיים משני צידי הסיליקון בעוצמה נמוכה וגבוהה כאחד. מוט הנעץ נראה מוטבע בסיליקון, וראש הנעץ חדר לרשתית ולסקלרה. כאן ברור שיש היפרדות רשתית לא מלאכותית ברשתית הלא מוכתמת משני צידי הסיליקון המוצג בעוצמה נמוכה וגבוהה כאחד.
הדוגמה הראתה שיש חוסר ארגון ברשתית בסמוך להידבקות ודחיסה של הרשתית בצד אחד עקב זווית החדרה אלכסונית. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להטמיע את הדגימה, לכוון אותה ולקפוץ אותה בזהירות, כך שמשטחי הקרקע המתקבלים יתיישרו בתוכנית הרצויה. יתר על כן, יש לאסוף תמונות מרובות בכל שלב טחינה מכיוון שלא ניתן לשחזר את דגימות הקרקע כיום.
שיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי היסטולוגיה של תותבות רשתית. ניתן ליישם אותו גם כדי לדמיין את ממשק רקמת המכשיר במערכות אחרות המשתמשות ברכיבים מושתלים קשיחים כגון שתלי מוח עמוקים, סטנטים לכלי דם או תותבת אורטופדית.
סקירה
מאמר זה מתאר טכניקות היסטולוגיות לדמיית רקמת עין סמוכה לסיכה אפירטינית מתכתית ולפרוסת רשתית. השיטות מאפשרות הערכת בריאות העין ביחס לשתלים ברשתית, תוך התגברות על מגבלות של תהליכים היסטולוגיים מסורתיים.
רכיבי מחקר עיקריים
תחום המדע
- נוירולוגיה
- אופתלמולוגיה
- היסטולוגיה
רקע
- פרוסות רשתית מכילות לעתים קרובות רכיבים מתכתיים קשים.
- שיטות היסטולוגיות מסורתיות אינן תואמות לשתלים אלו.
- הבנת ממשק הרקמה-השתל היא חיונית לבטיחות ויעילות המכשיר.
- שיטות קיימות עשויות שלא לדמות את השתל באתר.
מטרת המחקר
- לפתח טכניקות להערכת בריאות רקמת העין סמוכה לפרוסות רשתית.
- לדמות את הארכיטקטורה התאית סביב מכשירים מושתלים.
- לחדד את העיצוב של שתלים ברשתית בהתבסס על ממצאים היסטולוגיים.
שיטות ששימשו
- כריתת העין ותיקוןה.
- ניתוח דגימות רקמות כולל השתל.
- התייבשות הדרגתית והטמעה בשרף אפוקסי.
- טחינה וצביעה של גושי שרף לצורך הדמיה.
תוצאות עיקריות
- דמיה מוצלחת של רקמת העין סמוכה לשתל ברשתית.
- איסוף תמונות חתך רוחב להערכת שלמות הרקמה.
- הוכחת היתרונות של השיטה על פני היסטולוגיה מסורתית.
- תובנות לגבי השלמות המבנית של רקמות ליד השתלים.
מסקנות
- הטכניקות שפותחו מאפשרות הערכה יעילה של בריאות העין סמוך לפרוסות רשתית.
- שיטות אלו יכולות להודיע על גישות עיצוב וכירורגיות עתידיות לשתלים ברשתית.
- דמיית ממשק השתל-הרקמה היא חיונית להבנת התאימות הביולוגית.
