Identification of Kinase-substrate Pairs Using High Throughput Screening

Courtney Reeks; Robert A. Screaton

doi:10.3791/53152

זיהוי של זוגות קינאז-מצע שימוש הקרנת תפוקה גבוהה

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Identification of Kinase-substrate Pairs Using High Throughput Screening

זיהוי של זוגות קינאז-מצע שימוש הקרנת תפוקה גבוהה

Full Text

8,602 Views

11:13 min

August 29, 2015

DOI: 10.3791/53152-v

Courtney Reeks¹, Robert A. Screaton^2,3

¹Children's Hospital of Eastern Ontario Research Institute, ²Sunnybrook Research Institute,University of Toronto, ³Department of Biochemistry,University of Toronto

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

זרחון חלבונים הוא מאפיין מרכזי של האופן שבו תאים מפרשים ומגיבים למידע בסביבה החוץ-תאית שלהם. כאן, אנו מציגים פרוטוקול סינון בתפוקה גבוהה באמצעות קינאזות מטוהרות מתאי יונקים כדי לזהות במהירות קינאזות המזרחנות סובסטרט (ים) מעניין.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לזהות קינאזות המזרחנים מצע מעניין באמצעות שיטות סינון בתפוקה גבוהה. זה מושג על ידי טרנסקטציה ראשונה של תאים עם פלסמידים המבטאים קינאזות FU לגלוטתיון כטרנספראז או GST. השלב השני הוא ביצוע משיכת קינאז GST.

לאחר מכן, הדגימות נטענות בג'לים, אשר לאחר מכן מופעלים ומוכתמים בצבע כחול מבריק קומאסי. השלב האחרון הוא ייבוש הג'לים וחשיפתם לסרט רדיוגרפיה אוטומטית. בסופו של דבר על ידי פיתוח ופירוש הסרטים המתקבלים, ניתן לזהות זוגות מצעי קינאז שכן כל נתיב מייצג בדיקת קינאז מובחנת.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos