Name: אפיון רקמות לאחר שיטה חדשה חלוקה לעור מיקרו שתלי הדור (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: למדו שיטה חדשנית ליצירת שתלי עור מיקרו אוטולוגיים לטיפול מיידי בפצעים כרוניים, כוויות וכיבים טראומטיים. השיטה שומרת על חייות תאים ומציעה פתרון יעיל, מהיר ונגיש לרופאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים הודות ד&quot;ר פדריקה Zanzottera לתרום לחקר ביצוע ניתוח תזרים cytometry.

הצהרת אתיקה: מאז היישום הקליני של הפרוטוקול מחייב שימוש רקמות עצמיות עורית של המטופל, האפיון שלה במבחנה בוצעה לפני שימוש קליני על רקמות עורית הומולוגיות בבנק עור האזורי אמיליה רומניה ביצוע ההנחיות של חוקי המדינה על קצירה, עיבוד והפצת רקמות להשתלה (CNT 2013). 1. בניין ביו-קומפלקס עבור יישומים קליניים הערה: פרוטוקול זה מבוסס קליני על השימוש Rigeneracons (משבש רקמות) ואת מכונת Rigenera (מערכת משבש רקמות) (איור 1 א). משבש הרקמות הוא משבש רפואי ביולוגי של רקמות אדם מסוגלות לשבש חתיכות קטנות של רקמות באמצעות רשת שמספקת להבי משושה ותאי סינון מרכיבי תאי מטריקס עם ניתוק של כ -50 מיקרון. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף skinsamples של המטופל באמצעות דואגרוף opsy (איור 1B) ו disaggregate הוספת 1 ​​מ&quot;ל של תמיסת מלח בעד כל יחידה להשיג 6,7,9 מיקרו שתלי עצמיים (או ראה שלב 2.1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום 1 מ&quot;ל של שתלי מיקרו על ספוגים קולגן (איור 1 ג) מתחמי ביו toform להשתמש עבור יישומים קליניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות 1 מ&quot;ל נוסף של שתלי מיקרו על ספוגים קולגן בנוכחות 6 מ&quot;ל של מדיום DMEM בתוספת 10% עוברית שור סרום על 37 מעלות צלזיוס באווירה humidified 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות 3 ימים של תרבות, לתקן את מתחמי ביו עם Paraformaldehyde 0.3% במשך 10 דקות ב RT. יוצק את פרפין עם מתקן ספציפי ישירות על המדגם. השג פרוסות עם microtome עם עובי של 5 מיקרומטר ולשים ישירות א-שקף זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול פרוסות פרפין 5 מיקרומטר בכוס עבור ניתוחים היסטולוגית, המכיל 15 - 20 מ&quot;ל קסילן (זמינים מסחרית - שילוב של-קסילן מ (40 - 65%), p-קסילן (20%), o-קסילן (20% ) ו ת &#39;בנזן י.ל. (6 - 20%) ואת עקבות של טולואן, בנזן trimethyl, פנול, thiophene, פירידין ומימן גופרי) עבור 3 דקות כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את פרוסות בכיתות ירידה (100% עד 70%) של אתנול (אתנול 100% עבור 1 שעות, אתנול 95% במשך שעה 1, 80% אתנול עבור 1 שעות, 70% אתנול עבור שעה 1) ולאחר מכן מים deionized עבור דה-paraffinizing ו rehydrating הסעיפים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכתם בסעיפים עם 1 - 2 מ&quot;ל של 1g / L Ematoxylin 1 - 2 דקות ולאחר מכן לשטוף במים כדי להסיר כל עודף Ematoxylin. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם בסעיפים 4 - 5 דקות עם פתרון אלכוהוליים Eosin Y ב 1% של הריכוז מהול% אתנול 70 ו מדולל במים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 1 - 2 מ&quot;ל של Eosin Y עבור כל מקטע השקופית ולשטוף תחת מי ברז זורמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול סעיפים בהגדלת ציונים של אתנול (ראה שלב 1.6) ולבסוף, אחרי מעבר קסילן עבור 1h, coverslip עם הרכבה מבוססת mediumand להתבונן במיקרוסקופ אור בהגדלת 100x (1D איור). </li> &lt;/ Ol&gt; 2. אוסף, חלוקה ו בניתוח חוץ גופית של רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות dermatome, לקחת רקמת העור עצמאית, הדרמיס papillary-epidermized דה (Ded) או הדרמיס רשתי (הדרמיס) בהתאמה של 0.6 מ&quot;מ, 1 מ&quot;מ או 2 מ&quot;מ עובי מאזור תא המטען של 4-איבר רב שונים ו / או רב תורם רקמה נעימה בין 40 עד 55 שנים, לפי החוקים הלאומיים קציר, עיבוד והפצה של רקמות להשתלה (CNT 2013). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות ולשטוף את כל הדגימות בתמיסת 0.9% NaCl לשים אותם בצלחת על שייקר מסלולית במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות ביופסיה של 5 מ&quot;מ, ליצור דוגמאות אשר הם אחידים בקוטר מרקמת העור, Ded ו הדרמיס ולשקול כל דגימות רקמה לפני חלוקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כנס שמונה, שלוש או ארבע דגימות אחידות של רקמת עור, Ded או הדרמיס בהתאמה, המשבש הרקמות, הוספת 1.5 מיליליטר של תמיסת מלח על החלוקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע שונהבעתות חלוקות לכל דגימות הרקמה הצביעו כפי בטבלה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספר כתב של ביופסיות אגרוף נגזרות דגימות רקמת שלמים כקבוצת ביקורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חלוקה מכני, לשאוב את תמיסת מלח המכיל מיקרו-שתלי ומקום בנפרד כל דגימה בתוך באר אחת של צלחת 12-היטב. בצע את הפרוטוקול זהה עבור ביופסיות אגרוף שליטה ללא פגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1ml של מדיום 1640 RPMI בתוספת 10% בסרום שור עוברי (FBS) ואנטיביוטיקת מדגם זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את כדאיות התא מיד. זה טוב המכיל-שתל מיקרו (והושג ע&quot;י חלוקה סימולטני של שמונה, שלושה או ארבעה דגימות אחיד של רקמת העור, Ded או הדרמיס בהתאמה) להוסיף 1ml של המדיום המכיל 0.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​של MTT (3- [4,5- dimethylthiazol-2-י.ל.) פתרון ברומיד] -2,5 diphenyltetrazolium דגירה במשך 3 שעות ב 37 ° C באווירה של 5% 2 / אוויר CO. בצע את הפרוטוקול אותה לשליטה ללא פגעאגרוף ביופסיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה, להסיר את כל MTT בינוני המכיל ולהוסיף לכל sulfoxide דימתיל מדגם 1 מ&quot;ל (DMSO) במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר לדגום כל DMSO ב קובט ולקרוא בו צפיפות אופטית (OD) ב 570 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר. חישוב כדאיויות תא כיחס בין הספיגה ב 570 ננומטר ואת המשקל בגרמים (גר &#39;) של רקמה בשימוש לפני החלוקה. בצע את הפרוטוקול זהה עבור ביופסיות אגרוף שליטה ללא פגע. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חלוקה מכני, לשאוב את תמיסת מלח המכיל מיקרו-שתל נגזר רקמות העור, Ded ו הדרמיס דגימות של מתורם יחיד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים בנפרד כל דגימה בתוך באר אחת של צלחת 12-היטב או בבקבוק תרבות עבור מבחן כדאיות התא ניתוח מורפולוגי בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקרו-שתלי תרבות הוספת 1 ​​מ&quot;ל (צלחת 12-היטב) או 5 מ&quot;ל (בקבוק תרבות) של RPMI 1640 בתוספת בינוני עם 10% FBS ואנטיביוטיקה ב 37 ° C באווירה של 5% CO 2 / AIr למשך 24 שעות או 7 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את כדאיות התא לאחר 24 שעות או 7 ימים (חזור על שלבים 2.1.8-2.1.10). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע ניתוח מורפולוגי הערכת הנוכחות של תרחיף תאים על ידי מיקרוסקופ אור לאחר 24 שעות ו -7 ימים של תרבות בקבוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח דגימות של הדרמיס עבור חיוביות אל mesenchymal וסמנים תאים hematopoietic, כולל CD146, אנטיגנים CD34 ו CD45 על ידי FACS ניתוח 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת זרע תזרים ברדס למינרית כל-שתל מייקרו (והושג ע&quot;י החלוקה סימולטני של שמונה, שלוש או ארבע דגימות אחידות של רקמת עור, Ded או הדרמיס בהתאמה) ושבר כתב קטן של כל דגימת רקמה לא מפוצל לגמרי (&gt; 50 מיקרון גודל לאחר תהליך חלוק) על צלחת אגר קולומביה המכילה מרק דם כבשים 5% 100 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה את הצלחת על 37 מעלות צלזיוס למשך שלושה ימים ולבצע ניתוח מיקרוביולוגית על צלחת אגרה קולומביה כדי להעריך את העקרות 11. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skin+wounds%3A+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).</li>
<li>Ellis, E. III, Sinn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+homologous+bone+grafts+in+maxillofacial+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Maxillofac+Surg%22%5BJournal%5D)">Use of homologous bone grafts in maxillofacial surgery.</a> J Oral Maxillofac Surg. 51, 1181-1193 (1993).</li>
<li>Nguyen, A., Pasyk, K. A., Bouvier, T. N., Hassett, C. A., Argenta, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+survival+of+autologous+adipose+tissue+taken+and+transplanted+by+different+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Sur%22%5BJournal%5D)">Comparative study of survival of autologous adipose tissue taken and transplanted by different techniques.</a> Plast Reconstr Sur. 85, 378-389 (1990).</li>
<li>Abuzeni, P. Z., Alexander, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+Autologous+Fat+Transplantation+With+Platelet+Rich+Plasma%5BTitle%5D)+AND+%22AJCS%22%5BJournal%5D)">Enhancement of Autologous Fat Transplantation With Platelet Rich Plasma.</a> AJCS. 18 (2), 59-70 (2001).</li>
<li>Trovato, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+New+Medical+Device+Rigeneracons+Allows+to+Obtain+Viable+Micro-Grafts+from+Mechanical+Disaggregation+of+Human+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">A New Medical Device Rigeneracons Allows to Obtain Viable Micro-Grafts from Mechanical Disaggregation of Human Tissues.</a> J Cell Physiol. , (2015).</li>
<li>Zanzottera, F., Lavezzari, E., Trovato, L., Icardi, A., Graziano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Derived+Stem+Cells+and+Growth+Factors+Applied+on+Hair+Transplantation+Follow-Up+of+Clinical+Outcome%5BTitle%5D)+AND+%22JCDSA%22%5BJournal%5D)">Adipose Derived Stem Cells and Growth Factors Applied on Hair Transplantation Follow-Up of Clinical Outcome.</a> JCDSA. 4 (4), 268-274 (2014).</li>
<li>Giaccone, M., Brunetti, M., Camandona, M., Trovato, L., Graziano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+New+Medical+Device%2C+Based+on+Rigenera+Protocol+in+the+Management+of+Complex+Wounds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stem+Cells+Res%2C+Rev+%26+Rep%22%5BJournal%5D)">A New Medical Device, Based on Rigenera Protocol in the Management of Complex Wounds.</a> J Stem Cells Res, Rev & Rep. 1 (3), 3(2014).</li>
<li>Aimetti, M., Ferrarotti, F., Cricenti, L., Mariani, G. M., Romano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+dental+pulp+stem+cells+in+periodontal+regeneration%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Periodontics+Restorative+Dent%22%5BJournal%5D)">Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 34 (3), s27-s33 (2014).</li>
<li>Graziano, A., Carinci, F., Scolaro, S., D'Aquino, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periodontal+tissue+generation+using+autologous+dental+ligament+micro-grafts%3A+case+report+with+6+months+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22AOMS%22%5BJournal%5D)">Periodontal tissue generation using autologous dental ligament micro-grafts: case report with 6 months follow-up.</a> AOMS. 1 (2), 20(2013).</li>
<li>Brunelli, G., Motroni, A., Graziano, A., D'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinus+lift+tissue+engineering+using+autologous+pulp+micro-grafts%3A+A+case+report+of+bone+density+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Indian+Soc+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Sinus lift tissue engineering using autologous pulp micro-grafts: A case report of bone density evaluation.</a> J Indian Soc Periodontol. 17 (5), 644-647 (2013).</li>
<li>Ellner, P. D., Stoessel, C. J., Drakeford, E., Vasi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+culture+medium+for+medical+bacteriology%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">A new culture medium for medical bacteriology.</a> Am J Clin Pathol. 45, 502-504 (1966).</li>
</ol>

המחבר אנטוניו גרציאנו הוא המנהל המדעי של srl המוח האנושי גל כי מייצר ומשווק את מערכת Rigenera. המחבר לטיציה Trovato הוא משת&quot;פ של חטיבת מדעי של המוח האנושי גל srl

מחקר ראשוני מראה כי שתלי מיקרו-מתקבל על ידי פרוטוקול זה יכול להיות משולב עם ספוגים קולגן, כפי שכבר דווח ביישומים קליניים אחרים, כדי לייעל את היעילות של שתלים מיקרו שתלי 9, 10. בפרט, מחקר זה דיווח על קיבולת של ביו -complexes, היווה ידי שתלים-מייקרו וספוגי קולגן, כדי adjuvant לריפוי הפצע של נגע רגל לאחר 30 ימים מהגשת בקשה קלינית. יתר על כן, תוצאות במבחנה לספק ראיות לגבי היעילות של פרוטוקול זה disaggregate שלוש רקמות עורית שונות, שמירה על כדאיויות תא ניכרות הוא מי...

בשנים האחרונות, מספר שיטות חדשות פותחו בתחום הביוטכנולוגיה להשיג השעיות הסלולר עצמיות במהלך ניתוח על מנת לספק טיפולי צעד אחד עבור נגעי עור כרוניים וחמורים. יתר על כן, את הניהול של פצעים חריפים אבל בעיקר כרוניים כתוצאה מטראומה, סוכרת, זיהומים, וכן גורמים נוספים, נותר מאתגר. יש ראיות גוברות כי בפצעים כרוניים הפכו בעיה בריאותית עולמית רצינית, ועלולים ליצור ניטל כספי עצום על מערכות בריאות ברחבי עולם 1. כדי להגדיל את שיעור ההצלחה בטיפול נגעים בעור, בהיעדר המניפולציה נרחבת (כולל שיפור הסלולר) והשמירה על תנאים סטריליים חיוניים, כדי ליצור השעיה הסלולר שניתן ליישם באופן מיידי על האזור הפגוע של חולים, ובכך להימנע עיבוד יותר מן החדרים הנקיים כגון מפעלי סלולרי. רחובarting ביופסיות עור קטנים, טחינה, צנטריפוגה ושיטות הפרדה אחרות (למשל, אנזימטי או מכאני), משמשים לעתים קרובות כדי לקבל השעיה הסלולר, אשר יכול להיות מתורבתת במדיום גידול. כל השיטות האלה דורשים בדרך כלל זמן רב של ביצוע, והדגיש מבני התא, מה שמוביל לירידה של כדאיויות תא. היבט נוסף משמעותי הוא להשיג השעיה הסלולר עצמית מוכנה להיות בשימוש על ידי רופאים, למשל, כדי לתקן אזורים פגועים. יתר על כן, היא מבוססת היטב כי שתל רקמה עצמית לשרוד את נהלי ההעברה בסופו של דבר לשרוד האתר המקבל על פי העקרונות של אינדוקציה וחוטים 2, 3. רקמת השתל האידיאלית צריכה להיות זמינה ויש antigenicity נמוך באתר תורם לתחלואה 4. על בסיס עדויות אלה, המטרה הראשונה של המחקר הנוכחי הייתה ליצור מתחמי ביו עצמיים מתאימיםיישום קליני בתיקון רקמות. לשם כך, אנו מתארים שיטה חדשה לקבלה-שתל מייקרו עצמי החל רקמות עורית שהיו מפוצלות על פי פרוטוקול זה. הצגה מקרה גם מתוארת במסמך זה כיישום קליני של שתלי מייקרו העצמיים מתקבלים על ידי פרוטוקול זה בשילוב עם ספוגי קולגן. גישה זו כבר דווחה להיות יעיל החלוקה המכאנית של רקמות אנושיות 5 וזה כבר בשימוש קליני עבור שתלים והתחדשות של רקמות עורי 6,7 וכן עבור טיפולים רגנרטיבית של רקמות חיבור בכירורגיה אוראלית ולסת 8-10 . בנוסף, המטרה השנייה של המחקר היה ביולוגי והאפיון של הרקמות עורית לאחר החלוקה שלהם על ידי פרוטוקול זה. לשם כך, דגימות הומולוגיות שונות של רקמות עורית נגזרו באזור תא המטען של באיברים רבים שוניםו / או תורמים רבות רקמות עובד הבאים חוקים לאומיים קציר, עיבוד והפצה של רקמות להשתלה (CNT 2013) ב Skin אמיליה רומניה האזורית בנק. הצגת מקרה: מטופלת 35 בן מראה טראומה מורכבת בשל תאונת דרכים אושפז ביחידה לטיפול נמרץ של בית החולים אנקונה. החולה הראה זיהום על הרגל בשל פצע פתוח שבר מסובך התייצב עם קיבוע חיצוני. שנייה הטריה רדיקלית בוצעה וכאשר הפצע הפך נקי לאחר טיפול בלחץ שלילי (טיפול VAC) ואת קרום העצם ונראה בריא, אנחנו מוחלים הפרוטוקול לאחר חודשי התאוששות. לאחר חלוקה עם מערכת זו, מיקרו-שתלי השיג שימשו כדי ליצור ביו-קומפלקסים עם ספוג קולגן אשר הושתלו מכן על מנת לחקור את יעילותם על תיקון הנגע.

<table><tbody><tr><td>Rigenera Machine</td><td>גל מוח אנושי</td><td>79210R</td><td></td></tr><tr><td>Rigeneracons</td><td>גל מוח אנושי</td><td>79450S</td><td></td></tr><tr><td>MTT</td><td>Roche אבחון GmbH</td><td>11465007001</td><td></td></tr><tr><td>RPMI בינוני</td><td>PBI בינלאומי</td><td>733-2292</td><td></td></tr><tr><td>DMEM בינוני</td><td>PBI בינלאומי</td><td>F 0415</td><td></td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה</td><td>ביולוגית תעשיות PBI</td><td>03-038-1 &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>נוגדנים לניתוח FACS</td> קוד <td>eBiosciences</td><td>12-1469 עבור CD146-P; קוד 17-0349&nbsp; עבור CD34-APC&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>חברת קולומביה אגר</td><td>BioMerieux</td><td>43041</td><td></td></tr><tr><td>Condress&reg;</td>ספוג קולגן <td>Abiogen Pharma</td><td></td><td>המשמש לביו-קומפלקסים</td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl solution</td><td>Fresenius Kabi, Bad Homburg, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylene&nbsp;</td><td>קרלו ארבה</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

אפיון רקמות לאחר שיטה חדשה חלוקה לעור מיקרו שתלי הדור

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

כמה שיטות חדשות פותחו בתחום הביוטכנולוגיה להשיג השעיות הסלולר עצמיות במהלך ניתוח, על מנת לספק טיפולי צעד אחד עבור נגעי עור כרוניים וחמורים. יתר על כן, ההנהלה כרוני אלא גם פצעים חריפים כתוצאה מטראומה, סוכרת, זיהומים וכן גורמים נוספים, נותרת מאתגרת. במחקר זה אנו מתארים שיטה חדשה ליצירה-שתל מייקרו עצמי מרקמות עורית של חולה יחיד היישום הקליני שלהם. יתר על כן, במבחנה ביולוגית ואפיון של רקמות עורית נגזרו עור, הדרמיס-epidermized דה (Ded) ו הדרמיס של באיברים רבים ו / או תורמים רבות רקמות גם בוצע. כל הרקמות היו מפוצל על פי הפרוטוקול החדש, המאפשר לנו להשיג-שתלי מיקרו קיימא. בפרט, דיווחנו כי פרוטוקול חדשני זו הוא מסוגל ליצור ביו-מתחמים שהלחינו שתלי-מייקרו עצמי וקולגן ספוגים מוכן להיות מיושם על פצעים בעור. cliniיישום קאל של מתחמי ביו עצמיים על נגע ברגלו נמסר גם, מראה שיפור של שני תהליך מחדש epitalization ורכות של הנגע. בנוסף, המודל במבחנה שלנו הראה כי כדאיויות תא לאחר חלוקה מכאנית עם מערכת זו נשמרות לאורך זמן עד שבעה (7) ימים של התרבות. אנחנו גם ציינו, על ידי ניתוח תזרים cytometry, כי ברכת תאים המתקבלים חלוק מורכבת של תאים מסוגים שונים, כוללים בתאי גזע mesenchymal, כי להפעיל תפקיד מרכזי בתהליכי התחדשות ותיקון רקמות, עבור פוטנציאל ההתחדשות הגבוה שלהם. לבסוף, הראינו במבחנה כי נוהל זה שומר על סטריליות של שתלי מיקרו כאשר בתרבית במנות אגר. לסיכום, אנו מגיעים למסקנה כי גישת משובים חדשה זו יכולה להיות כלי מבטיח עבור קלינאים להשיג בצעד אחד קיימא, סטרילי ומוכנה לשימוש-שתל מייקרו שניתן ליישם לבד או בשילוב עם מרבית scaffo הביולוגי המשותףLDS.

במחקר ראשוני זה, המטרה הראשונה הייתה לבדוק את היכולת של שתלי מייקרו עצמיים אדם בשילוב עם תמיכה ביולוגית, כגון קולגן, לייצר ביו-מתחמים מוכנים לשימוש. ביו-מתחמים אלה הושתלו בחולה עם פצע ברגל נגרם על ידי (איור 2 א) בתאונת דרכים מחדש epithelialization מלא הקשורים לתקן רקמות לאחר 30 ימים (איור 2 ב) נצפה. יתר על כן, המעקב הקליני הראה מרקם טוב ורכות של האזור הפגוע לאחר 5 חודשים ...

הפרוטוקול מתאר שיטה חדשה disaggregate ברקמות אדם ליצור-שתל מייקרו עצמי, וזה ביחד עם ספוגי קולגן, להצמיח-מתחמים ביו אדם מוכנים לשימוש בטיפול נגעים בעור. יתר על כן, מערכת זו שומרת כדאיות התא של שתלי מיקרו בזמנים שונים לאחר חלוקה מכני.

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

המטרה הכוללת של המצאה כירורגית זו היא להפיק מיקרו-השתלות עור אוטולוגיות שיהיו מוכנות לשימוש מיידי באותה הניתוח לצורכי ריפוי פצעים. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחומי הרפואה הרגנרטיבית והנדסת רקמות העור בנושאים כגון ריפוי פצעים כרוניים, כוויות ואולקוסים פוסט-טראומטיים. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא קלה מאוד לשימוש על ידי רופא ללא צורך בטכניקה מומחית, והיא מהירה וזולה.כדי להתחיל, השתמשו במקדח ביופסיה כדי לאסוף דגימות עור ממטופל. לאחר מכן, הסירו והשליכו את שכבת האפיתל. שלבו כל דגימת רקמה עם 1 milliliter של תמיסת סלין כדי להפיק מיקרו-השתלות אוטולוגיות.להכנת ביו-קומפלקסים ליישום קליני, העבירו 1 milliliter של תמיסת המיקרו-השתל אל ספוגי קולגן. יישמו מיד את הביו-קומפלקס על האזור הפגוע של המטופל. לבדיקה in vitro, בחנו את חיוניות הביו-קומפלקס.לאחר שלושה ימי תרבית, שפכו פורמלין 0.3% ישירות על הביוקומפלקסים וקבעו אותם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. השתמשו במיקרוטום כדי לחתוך דגימות בעובי 5 micrometers והצמידו אותן ישירות לעגלה מזכוכית. לאחר מכן, הניחו את הדגימות ב-15 עד 20 milliliters של xylene למשך שלוש דקות.בשלב הבא, טבלו את הפרוסות בדרגות יורדות של אתנול למשך שעה בכל ריכוז, לפני ההעברה למים דה-יוניים כדי להסיר את הפרפין ולהחזיר לחות לחתכים. לאחר מכן, השתמשו ב-1 עד 2 מיליליטר של hematoxylin בריכוז 1 גרם לליטר למשך דקה עד שתי דקות לצביעת החתכים. העבירו למים כדי לשטוף את הצבע.כעת, בעזרת 1 עד 2 מיליליטר של 1%Eosin Y ו-70%ethanol המדוללים במים, צבעו את הנגדים במשך ארבע עד חמש דקות. לאחר מכן, שטפו את השקופיות תחת זרימה של מי ברז. טבלו את הנגדים בריכוזים עולים של ethanol למשך שעה בכל ריכוז, לפני דגירה של שעה ב-xylene.לבסוף, מרחו חומר הרכבה על הדגימות לפני הוספת זכוכית כיסוי. לאחר מכן, בצעו תצפית תחת מיקרוסקופ אור בהגדלה של 100x. באמצעות דרמטום, קחו דגימות בשכבה הפפילרית, רקמה מתה או דרמיס בעובי של 0.6 מילימטר, 1 מילימטר או 0.2 מילימטר, בהתאמה, מאזורי הגב של ארבעה תורמי רב-רקמות בני 40 עד 55, בהתאם לכללים הלאומיים לאיסוף רקמות.העבירו את הדגימות ל-0.9%NaCl והניחו אותן על שייקר אורביטלי למשך חמש דקות כדי לשטוף בעדינות את הרקמה. באמצעות מחץ ביופסיה של 5 מילימטר, צרו דגימות בעלות קוטר אחיד מרקמת העור, מהאפידרמיס והדרמיס, ושקלו את כל דגימות הרקמה. לאחר מכן, הכניסו לשובר הרקמות שמונה, שלושה או ארבעה דגימות אחידות של רקמת עור, מהאפידרמיס או מהדרמיס, בהתאמה, והוסיפו 1.5 מיליליטר של תמיסת סלין לצורך הדיסאגרגציה.בצעו פירוק (disaggregation) לכל דגימות הרקמה כפי שצוין בטבלה זו. השתמשו במספר תואם של ביופסיות נקביות (punch biopsies) שהופקו מדגימות רקמה שלמות כביקורות. לאחר הפירוק המכני, שאבו את תמיסת המלח המכילה את השתלים המיקרוסקופיים (micro-grafts) והניחו כל דגימה בנפרד בבאר אחת של פלטת 12 בארות.הוסף 1 milliliter של מצע RPMI-1640 מועשר ב-10%FBS ואנטיביוטיקה לכל דגימה. כדי להעריך את חיוניות התאים, הוסף לכל באר 1 milliliter של מצע המכיל 0.5 milligrams per milliliter של תמיסת MTT, והדגר בטמפרטורה של 37-degree Celsius ו-5%carbon dioxide למשך שלוש שעות. לאחר ההדגרה, הסר את מצע ה-MTT והחלף אותו ב-1 milliliter של DMSO.לאחר דגירה למשך 10 דקות, העבירו כל דגימה ב-DMSO לקובטה והשתמשו בספקטרופוטומטר לקריאת הצפיפות האופטית ב-570 ננומטר. חשבו את חיוניות התאים כיחס בין הבליעה ב-570 ננומטר לבין משקל הרקמה בגרמים שנעשה בה שימוש לפני הפירוק. לאחר מכן, ברגע שסביב התמיסת המלח מרקמת העור, דגימות מהדרמיס והדֶרמיס של תורם בודד, הניחו כל דגימה בנפרד בבאר של פלטה בעלת 12 בארות לבדיקת חיוניות תאים או בבקבוק תרבית לניתוח מורפולוגי.הוסיפו 1 milliliter של RPMI-1640 עם 10% FBS ואנטיביוטיקה לפלטת 12 הבארים, או 5 milliliters לבקבוק תרבית, ודגרו בטמפרטורה של 37-degree Celsius ו-5% carbon dioxide למשך 24 שעות או שבעה ימים, בהתאמה. לאחר 24 שעות, השתמשו במיקרוסקופיית אור כדי לבצע ניתוח מורפולוגי על ידי הערכת נוכחות של תרחיף תאים. חזרו על הפעולה ביום השביעי.באמצעות אנליזת FACS, נתחו את דגימות הדרמיס לסממנים של תאים מזנכימליים והמטופויטיים, כגון CD146, CD34 ו-CD45. הוסיפו מצע גידול לתאים המופרדים, ולאחר מכן דגרו בטמפרטורה של 37-degree Celsius למשך שלושה ימים. והעריכו את סטריליות הרקמה על ידי ביצוע אנליזה מיקרוביולוגית כפי שתואר בעבר.כפי שמוצג כאן, מיקרו-שתלים אוטולוגיים אנושיים שהועמסו באופן מיידי על תמיכת קולגן הושתלו בנגע ברגל. לאחר 30 ימים נצפתה רה-אפיתליזציה מלאה המלווה בתיקון רקמות. יתרה מכך, המעקב הקליני הראה מרקם ורכות טובים של האזור הפגוע לאחר חמישה חודשים.כפי שרשום בטבלה זו, נקבעו ספי של שמונה, ארבעה ושלוש ביופסיות שניתן לעבד בשלב אחד, והרקמות פורקו בארבעה זמנים שונים כדי לזהות את תנאי הפירוק האופטימליים לשמירה על חיוניות תאים טובה. הפירוק המכני המוצג בסרטון זה שומר על ערך ממוצע של 30% cell viability בכל דגימות העור, האפידרמיס והדרמיס, כאשר הן נבחנות בזמנים שונים ביחס לרקמה שלמה. גרף זה מראה כי לאחר 24 שעות, או שבעה ימים בתרבית, לא נצפתה שונות משמעותית ב-cell viability בדגימות רקמת עור עד למועד ההומוגניזציה בתרבית בהשוואה לזמן ההתחלה.עם זאת, נצפתה חיוניות מופחתת של דגימות מתות לאחר 24 שעות בתרבית בהשוואה לנקודת ההתחלה. אך חיוניות התאים הושבה לאחר שבעה ימים בתרבית. תוצאות דומות נצפו עבור הדרמיס.במידה ושולטים בטכניקה זו, ניתן לבצעה בחמש דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להסיר את השכבה האפיתליאלית מהעור. לאחר הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון פירוק רקמת עצם, כדי לענות על שאלות אחרות כמו מנגנון ריפוי העצם.לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחומי הרפואה הרגנרטיבית והנדסת הרקמות לחקור ריפוי רקמות במטופלים. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה כיצד לבצע הליך השתלת מיקרו-רקמה זה. זכרו כי עבודה עם רקמות עלולה להיות מסוכנת ביותר.יש לנקוט תמיד באמצעי זהירות, כגון הרכבת משקפי מגן, בעת ביצוע פרוצדורה זו.

tissue-characterization-after-new-disaggregation-method-for-skin

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ניתוח רקמות ספציפית של מודל התחדשות זקיקי שיער באמצעות lentivirus לתווך רווח או פסד--of-פונקציה.

ניתוח גנטי מהיר של איתות אפיתל-mesenchymal במהלך התחדשות שיער

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול המפורט ליצירת שחזורי עור אורגנוטיפיים תלת-ממדיים במבחנה לחקר התקדמות המלנומה. מודל עור זה מחקה הן את הארכיטקטורה והן את המורכבות הרב-תאית של איברים in vivo.

יצירת שחזורי עור מלא אורגנוטיפיים: הליך לביסוס מודל עור תלת ממדי באמצעות דגימות עור אנושיות

המטרה של פרוטוקול זה היא לבנות עור תלת מימדי בעובי מלא, הדומה לעור טבעי. עם מכשיר פציעה אוטומטי שנבנה במיוחד, ניתן ליצור פצעים מדויקים וניתנים לשחזור תחת שמירה על סטריליות.

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

הנדסת רקמות קרובות כולל בהרחבת חוץ גופית על מנת ליצור autografts לשחזור רקמות. במחקר זה שיטה להרחבת רקמות, התחדשות, ושחזור in vivo פותחה על מנת למזער את העיבוד של תאים וחומרים ביולוגיים מחוץ לגוף.

רקמות טחונות ב הדחוס קולגן: A Biotransplant המכיל נייד עבור תיקון Reconstructive המבוים יחיד

מטרת מאמר זה היא לספק פרוטוקול מקיף ומפורט כיצד ליצור עור אורגנוטיפי אנושי מהונדס גנטית מקרטינוציטים אפידרמליים ודרמיס אנושי נטול חיוניות.

דור של תרבויות עור Organotypic מהונדסות גנטי שימוש חסר חיוניות עור אדם

אנו מציגים פרוטוקול להשיג מטריצות תאים שמקורם עשירות בחלבונים תאים מטריקס, באמצעות crowders macromolecular (MMC). בנוסף, אנו מציגים פרוטוקול אשר משלב MMC בדור העור 3D organotypic שיתוף התרבות, אשר מקטין את זמן תרבות תוך שמירה לפדיון של מבנה.

עור 2D and 3D שיפור<em&gt; במבחנה</em&gt; מודלים שימוש להצטופפות מולקולארית

כאן נתאר פרוטוקול להפקת קציר מחטים יכול לשמש כדי לאסוף רקמת עור בעובי מלא מבלי שהדבר תורם באתר הצטלקות. המחטים יכול להיות משולב עם מערכת איסוף פשוט להשיג בנפח גבוה קציר.

מכשירי קצירת רקמות Microcolumns

אנו מציעים פרוטוקול זה מראה כיצד להבדיל keratinocytes נגזר תאי גזע pluripotent המושרה ו fibroblasts וליצור תא צורב של העור תלת-ממד באמצעות אלה keratinocytes ו fibroblasts. פרוטוקול זה מכיל צעד נוסף של יצירת מודל humanized עכברים. הטכניקה המובאת כאן תשפר את המחקר דרמטולוגית.

דור של תא צורב עור תלת-ממד של כבל דם-derived המושרה בתאי גזע Pluripotent

מטרת המחקר הזה היתה לפתח מודל מורטין של ריפוי פצע כוויות. כוויה תרמית המושרה על העור החלק של עכברים באמצעות תבנית פליז מחומם מראש. הרקמה הנשרפה הייתה מצופה בשתל עור שנקטפו מזנבו של עכבר תורם דומה גנטית.

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתיל עור אנושי בעכברים סוכרתיים שאינם שמנים (NOD)-scid interleukin-2 קולטן שרשרת גמא (NSG). בדו"ח נכללים תיאור מפורט של הכנת עור אדם להשתלה, הכנת עכברים להשתלה, השתלת עור אדם בעובי מפוצל והליך התאוששות לאחר ההשתלה.

מודל Xenograft לעור למניפולציה של תגובות חיסוניות אנושיות in vivo

למדו שיטה חדשנית ליצירת שתלי עור מיקרו אוטולוגיים לטיפול מיידי בפצעים כרוניים, כוויות וכיבים טראומטיים. השיטה שומרת על חייות תאים ומציעה פתרון יעיל, מהיר ונגיש לרופאים.

אפיון רקמות לאחר שיטה חדשה חלוקה לעור מיקרו שתלי הדור

גלה סרטונים נוספים