אפיון רקמות לאחר שיטה חדשה חלוקה לעור מיקרו שתלי הדור

המטרה הכוללת של המצאה כירורגית זו היא לייצר מיקרו-שתלי עור אוטולוגיים המוכנים לשימוש מיידי באותו ניתוח למטרות ריפוי פצעים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הרפואה הרגנרטיבית והנדסת רקמות העור לגבי דברים כמו ריפוי פצעים כרוניים, כוויות וכיבים פוסט טראומטיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא קלה מאוד לשימוש על ידי רופא ללא טכניקת ציפיות, והיא מהירה ובמחיר סביר.

כדי להתחיל, השתמש באגרוף ביופסיה כדי לאסוף דגימות עור ממטופל. לאחר מכן הסר והשליך את שכבת האפיתל. שלב כל דגימת רקמה עם 1 מיליליטר של תמיסת מלח ליצירת מיקרו-שתלים אוטולוגיים.

כדי להכין ביו-קומפלקסים ליישום קליני, העבירו 1 מיליליטר מתמיסת המיקרו-שתל על ספוגי קולגן. מרחו מיד את הביו-קומפלקס על האזור הפגוע של המטופל. כדי לבדוק במבחנה, את הכדאיות של הקומפלקס הביולוגי.

לאחר שלושה ימים של תרבית, שפכו 0.3% פורמלין ישירות על הקומפלקסים הביולוגיים וקבעו למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. השתמש במיקרוטום כדי לפרוס קטעים בעובי 5 מיקרומטר ולהרכיב ישירות על מגלשת זכוכית. לאחר מכן מניחים חלקים ל-15 עד 20 מיליליטר קסילן למשך שלוש דקות.

לאחר מכן, טבלו את הפרוסות בדרגות יורדות של אתנול למשך שעה אחת כל אחת לפני שמכניסים למים נטולי יונים כדי להפחית את הלחות ולהחזיר את החלקים. לאחר מכן השתמש ב -1 עד 2 מיליליטר של 1 גרם לליטר המטוקסילין למשך דקה עד שתיים כדי להכתים את החלקים. ומעבירים למים כדי לשטוף את הכתם.

עכשיו עם 1 עד 2 מיליליטר של 1% אאוזין Y ו-70% אתנול ולדלל אותו במים, יש להכתים את החלקים למשך ארבע עד חמש דקות. לאחר מכן השתמש במי ברז זורמים כדי לשטוף את המגלשות. טבלו את החלקים בריכוזים הולכים וגדלים של אתנול למשך שעה כל אחד לפני דגירה של שעה בקסילן.

לבסוף, החל מדיום הרכבה מבוסס על הדגימות לפני הוספת כיסוי. לאחר מכן התבונן תחת מיקרוסקופ אור בהגדלה של פי 100. באמצעות דרמטום, קח דגימות פפילריות, מתות או דרמיס בעובי 0.6 מילימטר, 1 מילימטר או 0.2 מילימטר, בהתאמה, מאזורי הגזע של ארבעה תורמים מרובי רקמות בני 40 עד 55 בהתאם לכללים הלאומיים לקציר.

הכניסו את הדגימות ל-0.9% NaCl והניחו על שייקר אורביטלי למשך חמש דקות כדי לשטוף בעדינות את הרקמה. בעזרת אגרוף ביופסיה של 5 מילימטר, צור דגימות בקוטר אחיד מרקמת העור, המתה והדרמיס, ושקול את כל דגימות הרקמה. לאחר מכן, הכניסו שמונה, שלוש או ארבע דגימות אחידות של רקמת עור, מתה או דרמיס, בהתאמה, לתוך משבש הרקמות, והוסיפו 1.5 מיליליטר של תמיסת מלח לפירוק.

בצע פירוק עבור כל דגימות הרקמה כפי שמצוין בטבלה זו. השתמש במספר תואם של ביופסיות אגרוף שמקורן בדגימות רקמה שלמות כבקרות. לאחר פירוק מכני, יש לשאוב את תמיסת המלח המכילה מיקרו-שתלים ולהניח כל דגימה בנפרד לבאר אחת של צלחת של 12 בארות.

הוסף 1 מיליליטר של מדיום RPMI-1640 בתוספת 10% FBS ואנטיביוטיקה לכל דגימה. כדי להעריך את כדאיות התא, לכל באר יש להוסיף 1 מיליליטר של מדיום המכיל 0.5 מיליגרם למיליליטר של תמיסת MTT, ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך שלוש שעות. לאחר הדגירה, הסר את מדיום ה-MTT והחלף ב-1 מיליליטר של DMSO.

לאחר דגירה של 10 דקות, העבירו כל דגימה ב-DMSO לקובטה והשתמשו בספקטרופוטומטר כדי לקרוא את הצפיפות האופטית ב-570 ננומטר. חשב את כדאיות התא כיחס הספיגה ב-570 ננומטר והמשקל והגרמים של הרקמה ששימשו לפני הפירוק. לאחר מכן, לאחר שתמיסת המלח נשאבה מרקמת העור, דגימות מתות ודרמיס מתורם יחיד, הניחו כל דגימה בנפרד בבאר של צלחת של 12 בארות לבדיקת כדאיות תאים או בקבוק תרבית לניתוח מורפולוגי.

הוסף 1 מיליליטר של RPMI-1640 עם 10% FBS ואנטיביוטיקה לצלחת 12 הבארות או 5 מיליליטר לבקבוק התרבית ולתרבית ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך 24 שעות או שבעה ימים, בהתאמה. לאחר 24 שעות, השתמש במיקרוסקופ אור כדי לבצע ניתוח מורפולוגי על ידי הערכת נוכחות השעיית תאים. חזרו על הפעולה ביום השביעי.

עם ניתוח FACS, נתח את דגימות הדרמיס מסמני תאים מזנכימליים והמטופויאטיים, כגון CD146, CD34 ו-CD45. הוסף מדיום לתאים המופרדים, ואז דגר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שלושה ימים. ולהעריך את סטריליות הרקמה על ידי ביצוע ניתוח מיקרוביולוגי כמתואר קודם לכן.

כפי שמוצג כאן, מיקרו-שתלים אוטולוגיים אנושיים שהועמסו מיד על תמיכת קולגן הושתלו בנגע ברגל. ואפיתל מחדש מלא הקשור לתיקון רקמות נצפתה לאחר 30 יום. יתר על כן, המעקב הקליני הראה מרקם ורכות טובים של האזור הפגוע לאחר חמישה חודשים.

כפי שמפורט בטבלה זו, נקבעו הספים של שמונה, ארבע ושלוש ביופסיות שניתן לעבד בשלב אחד, והרקמות פורקו בארבעה זמנים שונים על מנת לזהות תנאים אופטימליים של פירוק כדי לשמור על כדאיות תאים טובה. הפירוק המכני המודגם בסרטון זה שומר על ערך ממוצע של 30% כדאיות תאים בכל דגימות העור, מתות ודרמיס, כאשר הוא מוערך בזמנים שונים ביחס לרקמה שלמה. השתלה זו מראה כי לאחר 24 שעות, או שבעה ימים בתרבית, לא נצפתה שונות משמעותית בכדאיות התאים בדגימות רקמת העור בזמן ההומוגניזציה בתרבית בהשוואה לזמן ההתחלה.

עם זאת, נצפתה כדאיות מופחתת של דגימות מתות לאחר 24 שעות בתרבית בהשוואה לזמן ההתחלה. אבל כדאיות התאים הוחזרה לאחר שבעה ימים בתרבית. תוצאות דומות נצפו עבור דרמיס.

כאשר שולטים בטכניקה זו, ניתן לבצע טכניקה זו תוך חמש דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להסיר את שכבת האפיתל מהעור. לאחר הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו פירוק רקמת עצם על מנת לענות על שאלות אחרות כמו מנגנון ריפוי העצם.

לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הרפואה הרגנרטיבית והנדסת רקמות לחקור את ריפוי הרקמות בחולים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע הליך מיקרו-השתלה זה. אל תשכח שעבודה עם הרקמה יכולה להיות מסוכנת ביותר.

ותמיד יש לנקוט באמצעי הזהירות כגון משקפי בטיחות בעת ביצוע הליך זה.