יציבה מנוק של גנים הקידוד מיקתאי מטריקס חלבונים ב C2C12 Myאובלסט התא באמצעות סיכת ראש קטן (sh) RNA

פרוטוקול זה הוא משמעותי כי זה מאפשר לנו ללמוד את הפונקציה של חלבונים, כגון חלבוני מטריצה חוץ תאית, כי הם up-regulated בשלבים מאוחרים יותר של היווצרות myotube או התבגרות. שיטה זו יכולה לשמש כדי להפיל כל גן של עניין בתאי C2C12 באמצעות shRNAs ספציפיים ואת הכלים האנליטיים המתאימים עבור פנוטיפים. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שיצרנו תאי C2C12 שיכולים לדכא ללא הרף את הגנים המעניינים שלנו, אפילו במיאוטובים בוגרים.

ההיבט החשוב ביותר של הליך זה הוא לשמור על תאי C2C12 במצב מויש, כלומר בצפיפות תאים נמוכה במהלך תרבות תאים שגרתית. יום לפני ההמרה, זרעים חמש פעמים 10 לתאי C2C12 הרביעי למיליליטר בשני מיליליטר של DMEM שלם לגם בצלחת שש באר כדי להשיג 40 עד 50% confluence לאחר הדגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס ו 5%CO2. למחרת בבוקר, לשלב 100 microliters של 25 מילימולר נתרן כלורי אחד 1.5 מיליליטר תגובה צינור לכל תרבות גם עם 25.5 microliters PEI פתרון מלאי של תרבות תאים C2C12 מוצהר עבור דגירה של חמש דקות ב 37 מעלות צלזיוס.