Summary
葡聚糖硫酸钠（DSS），在饮用水管理是一个既定的小鼠急性结肠炎的炎症损伤模型。该协议列出了DSS的治疗方法和组织编制。
Abstract
结肠炎可发生病毒或细菌感染，缺血性侮辱，或自身免疫性疾病，最显着的溃疡性结肠炎和克罗恩病的结肠变种 - 克罗恩结肠炎。急性结肠炎患者可出现腹痛，腹胀，吸收不良，腹泻，便血和大便粘液。我们开始认识到环境，遗传学，和上皮屏障功能障碍在炎性肠病结肠炎动物模型已在推进我们对本病的认识至关重要之间复杂的相互作用。一种流行的模式涉及与低分子右旋糖酐硫酸钠（DSS）的补充对小鼠的饮用水，从而导致在结肠上皮损伤和一个强大的炎症反应，持续数天
Protocol
第1部分：损伤修复结肠炎模型
- 基线体重应获得每个鼠标之前开始直接资助的治疗。
- 设为3％（W / V）葡聚糖在水硫酸钠盐溶液，并用0.45μm的醋酸纤维素过滤器的过滤器。
- 四天的3％DSS解决方案，更换鼠笼的饮用水。这些老鼠不应该有任何其他来源的水（即排除放置在自动浇水系统的提示）。
- 第四天，一个额外的三天更换水DSS解决方案，允许一些结肠上皮复苏。 4天小鼠应权衡利弊，以量化结肠炎的系统性后果。减肥是常见的严重伤害。
- 第7天，权衡和牺牲的老鼠。小鼠可吸入过量的异氟醚，或其他制度上安乐死，IACUC批准的方法。
第2部分：剖检和科隆收获
- 揭露鼠标和安全的腿腹端，腹部，以确保通畅的访问。完全用70％乙醇湿腹部。
- 抓住组织钳腹部中线，从而延长向上露营的皮肤。使用细尖的剪刀切开腹部暴露腹腔内容。延长切口的xyphoid过程中提示在中线，然后沿伪劣方面的双边沿海的利润率延长。
- 确定小肠，盲肠和结肠。仔细解剖/挑逗从周围的肠系膜结肠。断面结肠深藏在骨盆免费的远端结肠和直肠。在colonocecal距断面免费近端结肠的结肠。必须小心，在此过程中，不损害结肠清洗结肠，将是有问题的的，如果发生穿孔。
- 使用20G喂养的针头和10 ml注射器，插管和冰冷PBS冲洗大肠，直到洗脱液是完全明确的大便。
- 在这一点上，如果想要的宏观分析，在解剖显微镜，冒号，可以固定为“香肠”。如果病理分析只需要进行第4部分“急性结肠炎组织学分析制作的瑞士卷”。
第3部分：处理整个结肠的宏观分析“香肠”
- 重要的是结肠保持正确的方向，因此，保持最接近运营商结肠远端。切两片非吸收缝合线（SP116 1.5公吨编织丝绸），一个约1英寸长，其他的2英寸。
- 使用2英寸片缝合，以配合末端接近尽可能的保证金，同时仍保持良好的密封。
- 放置一个20G的喂养针含5毫升10％福尔马林磷酸盐缓冲到近端的结肠。松散的领带喂养针灯泡立即近端缝合，其余部分。牢牢把握冒号在喂养针灯泡和注入福尔马林，直到结肠扩大。在缝合拧紧结，你退出喂养针，从而使作为“香肠”的注入，扩大结肠。
- 填写一个15毫升的锥形管，用10％福尔马林磷酸盐，并将其放置在管在结肠。修正为24小时。
- 倒入福尔马林和一个额外的24小时用70％乙醇代替。 （冒号可以存储在70％乙醇在室温下无限期。）
- 从锥形管中取出结肠和削减每年年底的字符串，用手术刀小心不要破坏结肠。请记住，末端的字符串最长的那块。削减纵向从远端到近端结肠，使之形成一个长表。此时，冒号可以被看作在解剖显微镜下。
第4部分：急性结肠炎的组织学分析的瑞士卷
- 重要的是结肠保持正确的方向，因此，保持最接近运营商结肠远端。
- 测量结肠长度。该指标损伤的严重程度的另一个指标。结肠炎增加水肿，并缩短整体结肠长度。
- 用细尖的剪刀，切割纵向从远端到近端结肠。用细尖镊子把握要么切口的边缘和横向打开远端，近端自己的方式工作，从而为平板显示结肠。
- 滚动结肠需要一个钳和一双双手技术。把握要么钳远端缘的边缘。顺序辊旋转并释放钳继续向近侧缘结肠。从而产生了第三个维度或“瑞士卷”的一个螺旋。要保持卷的形式，牢牢把握辊钳和断面与27G1 / 2针。安全针，弯针，因为它退出卷筒。
- 放置在一个适当的标记组织的录音带和一罐10％的轧辊，缓冲福尔马林磷酸盐在室温为24小时，以确保组织固定。
- 倒入福尔马林和一个额外的24小时用70％乙醇代替。 （冒号可以存储在70％乙醇在室温下无限期。）
- 一旦样品已被固定，石蜡包埋，切片和病理分析的幻灯片上。
第5部分：代表结果
急性结肠炎的DSS模型允许研究者获取，修复，和分析一个冒号，急性结肠炎模型。瑞士卷被切断，安装时，应该形成一个代表整个结肠切片，如果推出正确（图1）。安装成卷，可与H＆E染色，以确定损害程度的结肠，从远端（内）结束的近端（外）结束（图2）。也可进行免疫组织化学瑞士卷，以确定和量化炎症浸润。如果香肠的方法已被正确地执行，将固定结肠扩张，整个粘膜表面，可以轻松地操纵下的解剖显微镜（图3）观察。
图1，正确执行的“瑞士卷“。 （一）结肠推出从远端到近端，用针横断和弯针年底固定。它，然后放置在一个固定的组织卡带。 （二）H＆E染色5微米的鼠标与决策支持系统（D =远端结肠P =近端结肠）治疗结肠作出了瑞士卷部分。
图2：决策支持系统治疗冒号显示急性结肠炎的迹象。炎症和隐窝损伤DSS治疗结肠水治疗控制比较明显。
图3。“香肠”的一个例子。香肠用福尔马林注入完全展开。一个很小的角度，将目前中学的自然弧度的结肠。打开香肠应平放。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
这个协议可以进行修改，以急性损伤，损伤修复，或慢性结肠损伤过程模型。
急性损伤的修改：
决策支持系统治疗4-6天，立即牺牲即兴
损伤修复的修改：
伤4-6天3-4天，和牺牲的恢复期间（如在上述协议中所述）的DSS的治疗。
慢性结肠炎的修改：
小鼠被放置在三个为期五天的3％DSS的周期，每个周期之间的复苏16天。小鼠牺牲后的最后16天的休息时间。
有几个问题，研究人员需要意识到这个模型：
- 在损伤部位的变异：在我们手中，我们看到一个远端为主的损伤模式，与近端结肠和盲肠的相对备用。其他有报道更近端的损伤模式的优势。
- 环境变化。有显着的环境变化。这是可能的，部分原因是由于肠道菌群，饮食和其他环境因素的差异。
- 这种模式是无效的，如果使用超高分子量DSS是（即50万大）。
- 是具有相当大的压力这种模式4变异。
生化分析结肠可抽取样本从近端或远端的利润。根据损伤的严重程度，这可能会影响你的能力产生病理损伤评分。在体内的BrdU标签来衡量扩散，可以通过腹腔注射16.7微克/公斤BrdU 2小时前牺牲α- BrdU免疫组化处理。
作为替代的“香肠”，冒号可以是固定的完全平坦的。线的Whatman纸与特百惠容器的底部，并浸泡于10％的纸张缓冲福尔马林磷酸盐。剖析在“第2部分：剖检和结肠癌的收获”中描述的结肠。再次，保持最接近运营商结肠远端。用细尖的剪刀，切割纵向从远端到近端结肠。随着细尖镊子把握或者边缘的切口和开放的横向合作，从而为平板显示冒号。转让本单位的工作表，预先浸泡的Whatman纸。盖上另一块的Whatman和湿夷为平地的结肠，用10％福尔马林磷酸。的滤纸应在福尔马林完全覆盖，但没有这么多，它升空结肠。密封的特百惠，24小时修复。从特百惠中取出结肠和10毫升70％乙醇15 ml锥形管。 （冒号可以存储在70％乙醇在室温下无限期。）
有几种方法量化结肠损伤5,6,7。一种方法，例如，使用一个多参数的规模，其中包括：炎症，参与程度，再生，隐窝破坏 ，以及第8％参与。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
范德比尔特IACUC规定的准则和法规的规定进行了动物实验。
Acknowledgments
由美国国立卫生研究院（1 K08 DK080221 - 01）和范德比尔特机构发展基金提供的资金。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dextran Sulfate Sodium Salt | USB Corp., Affymetrix | 9011-18-1 | mol wt 40,000-50,000 |
| 10% Buffered Formalin Phosphate | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals, Inc. | NDC 57319-474-06 | |
| TISSUE PATH Macrosette Cassettes | Fisher Scientific | 15182706 | |
| BD 10 ml Syringe | BD Biosciences | 309604 | |
| Ethyl Alcohol | Pharmco-AAPER | E190 | Dilute to 70% with distilled water |
| 20G Straight Feeding Needle | VWR international | 20068-612 | |
| 27G1/2 PrecisionGlide Needle | BD Biosciences | 305109 | |
| Dissecting Scissors Sharp/Blunt Tip | VWR international | 82027-588 | |
| Waugh Forceps | VWR international | 82027-428 | |
| Non-absorbable Suture | LOOK Surgical | SP116 | |
| Whatman Blotting Paper | VWR international | 28298-020 | Cut as needed |
| Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter | Cole-Parmer | EW-06731-2 | |
| Carbon fiber composites digital caliper | Fisher Scientific | 15-007-958 |
References
- Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).
- Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis. Gastroenterology. 131 (2), 579-588 (2006).
- Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine. Lab Anim. 15 (1), 57-59 (1981).
- Mahler, M. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).
- Aharoni, R. Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease. J Pharmacol Exp Ther. 318 (1), 68-78 (2006).
- Hahm, K. B. Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease. Gut. 49 (2), 190-198 (2001).
- Green, B. T. Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287 (6), G1238-1246 (2004).
- Dieleman, L. A. Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines. Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).
