Abstract
وتوجد متلازمة السلوكية عندما تتفاعل سلوكيات معينة تحت سياقات مختلفة. وقد الزرد اختبار المواضيع في الدراسات الحديثة وذلك من المهم توحيد بروتوكولات لضمان التحليلات والتفسيرات المناسبة. في دراساتنا السابقة، قمنا بقياس الجرأة من خلال رصد مجموعة من السلوكيات (الوقت قرب السطح، الكمون في التحولات، وعدد من التحولات، والسهام) في خزان شبه منحرف 1.5 لتر. وبالمثل، فإننا كميا العدوان من خلال مراقبة لدغ، ويعرض الجانبية، والسهام، والوقت قرب مرآة مائلة في مستطيلة خزان 19 لتر. بقسمة خزان 76 لتر الى الثلثين، ونحن أيضا فحص تفضيلات shoaling. فحص shoaling هو فحص عالية للتخصيص، ويمكن أن تكون مصممة لفرضيات محددة. ومع ذلك، بروتوكولات لهذا الاختبار أيضا يجب أن يكون موحدا، ولكن مرنة بما فيه الكفاية لالتخصيص. في دراسات سابقة، كانت غرف نهاية إما فارغة، تضمنت 5 أو 10 الزرد، أو 5 danios اللؤلؤ (د albolineatus). في فلخوار مخطوطة، نقدم بروتوكول مفصلة وبيانات تمثيلية التي تصاحب التطبيقات الناجحة للبروتوكول، والتي سوف تسمح لتكرار التجارب متلازمة سلوكية.
Introduction
هناك مجموعة متزايدة من الأدب التحقيق في الجمعيات بين السلوكيات المتميزة داخل الحيوانات الفردية من عدد معين من السكان. ويطلق على هذه الجمعيات المتلازمات السلوكية، والقياسات وعادة ما تشمل الجرأة والعدوانية والسلوك الاستكشافي، ومؤانسة 1-5. المتلازمات السلوكية ذات قيمة لأسباب المباشرة وغير المباشرة على حد سواء. مباشرة، ويمكن معرفة المتلازمات السلوكية تقديم رؤية أكثر تكاملا من الناحية النظرية التطورية، التركيبة السكانية، وديناميات السكان 3. بشكل غير مباشر، والمعرفة بشأن الجمعيات السلوكية قد تبلغ الحقول التي قياس السلوك مثل الصيدلة 6، وعلم السموم 7، وعلم الوراثة السلوكي 8،9، وأمراض الغدد الصماء 10. وبسبب هذه الفوائد المباشرة وغير المباشرة، وزيادة المعرفة من المتلازمات السلوكية هي قيمة خاصة في الكائنات الحية النموذج المستخدم عادة مثل الزرد. تم العثور على الدراسات التي تستخدم الزرد طنا متنوعة من التخصصات، بما في ذلك تحليل المتلازمات السلوكية 11-13. لتعزيز المعرفة في مجال البحوث متلازمة السلوكي، ولأن التخصصات الأخرى أيضا استخدام القياسات السلوكية لاختبار الفرضيات، يطلب الوصف موثوقة وموجزة لسلوك التحليلات والتفسيرات صحيحة وبروتوكولات موحدة من شأنها تسهيل المقارنات بين الدراسة داخل الأنواع. وقد تم تطوير بروتوكول لدينا لقياس متلازمة سلوكية الجرأة-اعتداء shoaling في عدد سكانها تربى مختبر الزرد 14. ومع ذلك، فإن أساس بروتوكول (تتبع الأسماك الفردية، وضمان التوزيع العشوائي الصحيح، والتحليلات المناسبة) يمكن تعديلها بسهولة لمجموعة متنوعة من التدابير السلوكية البديلة. بالإضافة إلى ذلك، المقايسات جرأة والعدوان، أو shoaling يمكن تشغيل على حدة لاختبار فرضيات مختلفة. لذلك، في حين أنه هو هدفنا لوصف كيفية إجراء دراسة متلازمة سلوكية وبروتوكول لنجاح ل الفرديإيفل القياس السلوكي، كل وجه من وجوه هذا الإجراء يمكن أن تقف وحدها.
الأدب على المتلازمات السلوكية يمتد عدة مجموعات تصنيفية، من المفصليات للإنسان 4 و، من أجل قياس متلازمة سلوكية، يجب تقدير لا يقل عن اثنين سياقات سلوكية. لسوء الحظ، ليس هناك اتساق في كثير من الأحيان قليلا في المقايسات التي تستخدم لقياس قياس السلوكي عبر محاور السلوك. على سبيل المثال، في الأسماك، ويمكن قياس جرأة باستخدام فحوصات T-المتاهة، المقايسات حقل مفتوح، أو مقدمة لرواية أو التحفيز الأجانب 15. دراسات العدوان في الأسماك قد تنطوي على تفاعلات المثنى، يضفي فحوصات التحفيز الفيديو، أو المقايسات نموذج من الطين 12،16،17. وبالمثل، وتحليل سلوك shoaling، التي عادة ما ينطوي على قياس تفضيل shoalmate، قد يتم تنفيذ في أنواع مختلفة من الدبابات، مع أساليب مختلفة لتحديد الوقت جمعية 21-23. في هذا البروتوكول مجموعة فرعية معينة من overaوتقدم ليرة لبنانية السلوكي فحص ذخيرة. على وجه التحديد، ويعرض هذا البروتوكول منهجية لتتبع الأفراد من خلال الجرأة، والعدوان، والمقايسات shoaling بطريقة يسهل مقارنات ضمن الأفراد لتحديد ما إذا كانت المقارنات متناسقة عبر جميع الأفراد الموجودين في عدد السكان. وقد أجرينا هذا البروتوكول مع الزرد والبلطي المدان (Amatitlania nigrofasciata) في دراسات سابقة 14،18، وأنها ستعمل مع أي أسماك المياه العذبة ذات الحجم المماثل.
وتجرى فحوصات جرأة في خزان شبه منحرف 1.5 لتر يحتوي على خط أفقي ترسيم المناطق الحجم متساوية في الأجزاء العلوية والسفلية من الخزان. وتشمل السلوكيات كميا عدد من التحولات التي كتبها الأسماك اختبار بين الجزء العلوي والسفلي من الخزان، والوقت الذي يقضيه في كل جزء، وعدد من السهام، والكمون لدخول الجزء العلوي. يتم تنفيذ فحص العدوان في خزان مستطيلة 19L يتضمن3 بوصة × 5 بوصة مرآة ارتفع بنحو 22 درجة تقع في الزاوية اليسرى السفلى من الخزان 19. وتشمل السلوكيات كميا المبلغ الإجمالي من الوقت الذي يقضيه الأسماك الهدف التفاعل مع مرآة 20، جنبا إلى جنب مع مؤشرات عدوانية محددة - عدد من لدغات، يعرض الجانبية، والسهام بين الأسماك الاختبار وانعكاسه. هذه مؤشرات محددة، يتم تعريف دغات كما الطعنات سريعة نحو مرآة مع فتح الفم، يتم تعريف يعرض الجانبية مثل إشعال الجانبي، والصدرية، والشرج وظهري الزعانف في اتجاه المرآة، والسهام أية تحركات غير المنتظمة التي ليست موجهة نحو المرآة. وأخيرا، وفحص shoaling الكمي سلوك سمكة الاختبار في غرفة مركزية للدبابات غرف الثلاثية. الدوائر جانب خزان إما فارغة أو تحتوي على "مياه ضحلة الهدف" من الأسماك، ويقاس الوقت تنفق الأسماك الاختبار قرب كل غرفة جانبية 21-23. والنتيجة المركبة واحدة، ويشار إلى سترينيتم احتساب GTH من Shoaling (SOS)، على كل سمكة اختبار الفردية ومحددة للمنبهات، ويمكن استخدامها في تحليل المصب 14. وسجل كل السلوكيات التي كتبها المشاهد واحد، أو مشاهد متعددة باستخدام البرمجيات الحرة الكمي السلوكية المعروفة باسم JWatcher 24.
اختبار وجود متلازمة سلوكية هو في المقام الأول المسعى الإحصائي، ويستحسن اتباع المبادئ التوجيهية على النحو الذي عرضه Budeav 2010 25 وعلى وجه التحديد، فمن المستحسن لإجراء تحليل المكونات الرئيسية (PCA) على البيانات وتركزت normed فيها المدخلات هي ناقلات سلوكيات الفرد في المقايسات مع قياسات سلوكية متعددة (أي الجرأة والعدوان). اتفاقية الشراكة والتعاون، يقوم على مصفوفة الارتباط، ويقلل من أبعاد القياسات السلوكية، ومن ثم استخراج أهم المعارف التي تشرح أغلبية من التباين. ويمكن بعد ذلك المكونات المستخرجة تفسر بسإد على شحنات ارتفاع عامل لسلوك الفرد من الفائدة والانحدار عشرات يمكن استخراجها لكل فرد على أساس من مكونات التفسيرية. ويمكن بعد هذه الدرجات الانحدار يمكن مقارنة لقياس SOS وغيرها من مختلف القياسات غير السلوكية مثل حجم الأسماك أو الجنس.
وقد تم تنفيذ هذا العمل في دراسة المتلازمات السلوكية الزرد التي تم اكتشاف الجنس متلازمة سلوكية محددة القائم بين الجرأة وshoaling 14. في هذه الحالة، هي أكثر جرأة من الذكور الزرد أكثر عرضة للربط مع أكبر، والأنواع أكثر عدوانية (د albolineatus)، ولكن يتم فقدان هذه الجمعية في الإناث. وقد تم تنفيذ هذا العمل أيضا في دراسة الأحداث المحكوم القربى القشريات (Amatitlania nigrofasciata) 18 التي لم تكتشف متلازمة سلوكية، ويحتمل أن يشير إلى اللدونة السلوكية من الأنواع. لذلك، يتم تقديم بروتوكول التالي ثإيث هدف ترسيم طبيعة ثلاثة فحوصات محددة (جرأة، والعدوان، وshoaling) في إطار دراسة متلازمة سلوكية المستوى الفردي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وقد تمت الموافقة على المنهجيات التالية للحصول على السكن والرعاية، ودراسة الزرد جامعة IACUC القديس يوسف.
1. الزرد الإسكان والرعاية
- الحصول على الزرد الموضوع من الموردين المحليين، أو من الأنواع البرية وصيدها. يرجى ملاحظة أن السكن الزرد يخضع لمبادئ توجيهية IACUC وتصاريح إضافية مطلوبة من أجل السكن الأنواع البرية وصيدها.
- تحديد والزرد منفصلة حسب الجنس. بدلا من ذلك، تخطي هذه الخطوة أو استبدالها مع طريقة مختلفة من الفصل على أساس فرضية الدراسة.
ملاحظة: خصائص الجنس من الصعب تحديد في الزرد، وخاصة في الإناث. الرجوع إلى هذه المبادئ التوجيهية 10 أو كتيبات مفيدة على الانترنت لتمييز الجنس. - عشوائيا فصل السكان الى مزيد من نسبة مناسبة من الأسماك تنسيق لتحفيز الأسماك. ملاحظة: أسماك التنسيق واتبعت اختبار المواضيع من خلال سلسلة من behavioالمقايسات راؤول، والأسماك التحفيز هي الأفراد التي ستشغل غرف التحفيز في العدوان وshoaling المقايسات.
ملاحظة: عادة، ما بين 1 و 5 الأسماك التحفيز في الأسماك تنسيق في المقايسات shoaling و1: التحفيز 1: تستخدم نسبة الأسماك تنسيق في المقايسات العدوان 14،17. ومع ذلك، يحتاج الباحث إلى وضع خصيصا الدراسة مع فرضية في الاعتبار (أي يجب أن تبقى التحفيز الأسماك ثابت للحفاظ على التناسق في سلوك الأسماك البؤري، أو ينبغي أن تكون استدارة التحفيز الأسماك بين كل فحص لضمان التوزيع العشوائي السليم). - تخزين جميع أنواع الأسماك في الرفوف الإسكان الزرد (27،5-28،5 درجة مئوية) تحت صارمة 12:12 دورة خفيفة / الظلام. إطعام كل الوصل والتحفيز الأسماك تقشر الغذائية اليومية والأسبوعية الأرتيميا، في أيام غير بحثية.
- تأكد من أن يتم جميع التجارب بين ZT1 وZT5 (الوقت zeitgeber) لتجنب الآثار إيقاع الساعة البيولوجية 26.
2. إعداد التوزيع العشوائي وتانك
- رعndomize جميع الأفراد مسبق لتسلسل محدد من المقايسات السلوكية. إعداد خطة التوزيع العشوائي ثابت باستخدام الانترنت تسلسل عشوائي مولد 27 أو عشوائية تسلسل مولد من حزمة البرامج الإحصائية (R).
- تسمية كل فحص 1-3 والحفاظ على هذه المهمة متسقة. تعيين تسلسل عشوائي على كل فرد ورسم خريطة للتسلسل وفقا للتسمية فحص السلوكية. على سبيل المثال، لمدة ثلاثة إجمالي المقايسات (1 تعيينها إلى Shoaling، 2 تعيينها إلى الجرأة، و 3 تعيينها إلى العدوان)، قد يكون لشخص معين سلسلة عشوائية من "2،3،1"، والتي سوف تتطلب منهم لأداء محددة المقايسات السلوكية في تسلسل محدد.
- إعداد الدبابات فحص (جرأة، والعدوان، وshoaling) في المختبر في الأماكن التي تقلل من إمكانية للمؤثرات الخارجية السلبية وتأكد من وجود مساحة كافية لكاميرا الفيديو لالتقاط الخزان بأكمله. تأكد من أن كاميرا الفيديو وكفى!ح الوضوح لعرض الملصقات دبابات وكذلك يكون قادرا على التمييز السلوكيات خفية من الأسماك التنسيق والإعداد كاميرا الفيديو في هذا الموقف.
- تسجيل جميع المقايسات السلوكية مع الكاميرا الاحتفاظ بها في نفس الموقف مع مرأى ومسمع من دبابات محددة للحد من الخلافات غير مقصودة في التهديف السلوكي نتيجة للتسجيلات التفاضلية.
ملاحظة: تجنب وضع الدبابات في المناطق الاتجار الثقيلة والأبواب كحركة والصوت سوف يؤثر على سلوك الزرد. - وضع بروتوكولات JWatcher فريدة من نوعها 24 لتسجيل كل فحص السلوكي. الرجوع إلى دليل JWatcher لمعرفة كيفية إنشاء الملفات الرئيسية تنسيق لتعيين السلوكيات لضربات المفاتيح وملفات التحليل تنسيق لتلخيص البيانات التي تم جمعها.
ملاحظة: JWatcher هو برنامج تسجيل السلوكية التي تسمح للموثوقة وقابلة للتكرار مخصصة التهديف السلوكي 24. - تحديد مخطط وضع العلامات لتتبع تاريخ، عدد الأسماك، وعدد فحص لجميع المقايسات السلوكية (على سبيل المثال،"F5-B-123115" يعني السمك 5، الجرأة الفحص، في 31 ديسمبر، 2015) وتسمية خارج الخزان مع الشريط في عرض وفي تركيز الكاميرا. الاحتفاظ بها وتسجيل هذه المعلومات في دفتر مختبر للإشارة سريعة ومراقبة الجودة في المستقبل.
- انشاء خزان التأقلم التي سيتم استخدامها بين جميع المقايسات وكذلك مباشرة بعد إزالة الأفراد من رف الإسكان.
ملاحظة: الدبابات التأقلم والدبابات النهائية هي أحواض السمك الصغيرة (40 سم × 20 سم × 25 سم) مع الحصى والتصفية التي تشبه الرف الإسكان. - بعد الانتهاء من فحوصات كل شيء، نقل الفرد في خزان محطة منفصلة من شأنها أن تكون بمثابة خزان المقصد النهائي لجميع الأفراد البؤري المستخدمة. استخدام خزان كبير بما فيه الكفاية لإيواء مجموعة من الأفراد للفترة المتبقية من حياتهم (على سبيل المثال، 25 جالون).
ملاحظة: من المهم جدا للحفاظ على درجة حرارة الماء ثابتة ووظروف مماثلة ACROSالصورة جميع الدبابات. وهذا يشمل السكن والتأقلم، وجميع دبابات الاختبار.
3. إجراء الفحص العدوان
- إجراء فحص العدوان في 19 L خزان مستطيلة قياس 30 سم × 15 سم × 10 سم. تجهيز خزان في أقسام مبهمة الخارجية المحيطة ثلاثة جوانب الخزان العدوان، وترك الجبهة تتعرض للعرض، للحد من مثيرات الخارجية غير مرغوب فيها. تقسيم دبابات تحمل علامات خارجية إلى أربعة أجزاء مستطيلة متساوية وإصلاح المرآة بشكل دائم (مع يسد سيليكون) في الربع السفلي الأيسر، يميل إلى 22.5 درجة تشكيل مثلث قائم الزاوية ضد الجانب أقصى اليسار من الخزان.
- تأكد من أن درجة حرارة الماء في الخزان التأقلم والعدوان الخزان في غضون 2 ° C الحامل الإسكان. للقيام بذلك، والعذبة، والمياه تتراوح أعمارهم ما قبل تحسنت إلى 27،5-28،5 درجة مئوية على استعداد لإضافة إلى خزان العدوان. يرجى ملاحظة أنه من المهم تغيير الماء بين كل فحص للقضاء لا مبرر لهاالعظة حاسة الشم.
- نقل، عن طريق الحجامة، سمكة الاتصال من رف الإسكان إلى خزان التأقلم منفصل حيث أنها سوف يتأقلم لمدة 10 دقيقة.
ملاحظة: من المهم للحد من الحوافز التي أدخلت على الأسماك من خلال سوء التعامل. نقل الأفراد كما هو موضح سابقا (27).- على وجه التحديد، يدويا وبعناية وضع صغيرة، كوب من البلاستيك الشفاف في خزان من الفائدة. دون تعطيل السمك بقدر ما نقل عن طريق استخدام شبكة، حلج القطن ببطء الأسماك في الكأس.
- تأكد من أن كاميرا الفيديو على استعداد لتسجيل عن طريق التأكد من خزان العدوان فحص (راجع الخطوة 3.1) هو في التركيز وعلى الفور قبل أن ينتقل الفرد إلى خزان العدوان، سجل الصحافة على الجهاز. نقل الأسماك الاتصال عبر الحجامة من خزان التأقلم على دبابات العدوان.
ملاحظة: من المهم أن يسجل قبل الأسماك دخول دبابات العدوان لتتبع الوقت المحدد للدخول. - تسجيل aggrخزان ession لمدة 10 دقيقة و 30 ثانية ثم كوب السمك التنسيق من خزان العدوان مرة أخرى إلى خزان التأقلم.
- عند مشاهدة تسجيل، وانتظر 30 ثانية بعد أن تم إدخال الأسماك إلى خزان باعتبارها فترة تأقلم إضافية قبل السلوكيات التهديف.
- باستخدام نظام التسجيل JWatcher محددة لالسلوكيات العدوانية، وتحديد السلوكيات التالية لمدة 10 دقيقة: الوقت المستغرق قرب مرآة، وعدد من النهج مرآة، وعدد من السهام، وعدد من محاولات لدغات (فتح الفم في اتجاه مرآة)، وعدد من العروض الجانبية (الظهرية، الصدرية، والشرج، وتركيب الزعانف الذيلية) 9.
- يسجل فحص العدوان واحد على الأقل مرتين، حتى سجل الفحص مع اتفاق عال بين التكرار.
4. إجراء جرأة الفحص
- إجراء فحص جرأة في صغير 1.5 لتر خزان شبه منحرف، قياس 15 سم X 26.5 سم أعلى س 22.5 سم عرض أسفل × 6 سم. التفاف ورقة مبهمة حول جميع الاطراف سو خزان ولكن ترك الجبهة تتعرض للعرض. وضع، قطعة واحدة رقيقة من الشريط الخارجي لخزان لترسيم الجزء العلوي من الجزء السفلي من الخزان.
- تأكد من أن درجة حرارة الماء في الخزان الجرأة هي ضمن 2 ° C الحامل الإسكان (راجع الخطوة 3.2)
- نقل الأسماك الاتصال من رف الإسكان إلى خزان التأقلم (راجع الخطوة 3.3) والسماح تأقلم لمدة 10 دقيقة.
- تأكد من أن الكاميرا هي على استعداد لتسجيل فحص جرأة، ومرة واحدة على استعداد لنقل الأسماك التنسيق، سجل الصحافة على الجهاز. نقل الأسماك اتصال من خزان التأقلم إلى خزان الجرأة وسجل لمدة 8 دقائق و 30 ثانية.
- عند مشاهدة تسجيل، والسماح لفترة إضافية التأقلم 30 ثانية بعد عرض الأسماك إلى الخزان قبل التهديف.
- باستخدام برنامج JWatcher، تحديد السلوكيات الجرأة لمدة 8 دقائق. على وجه التحديد، تحديد السلوكيات التالية: الزمان قرب السطح، الكمون لدخول الجزء العلوي، وعدد من هيئة تنظيم الاتصالاتnsitions في الجزء العلوي، وعدد من الحركات غير المنتظمة (السهام) 29.
- يسجل فحص جرأة واحد على الأقل مرتين، حتى سجل الفحص مع اتفاق عال بين التكرار.
5. إجراء الفحص Shoaling
- إجراء فحص shoaling في خزان 76 L الذي يحتوي على ثلاث مقصورات مقسوما على اثنين فواصل زجاجية مختومة مع سيليكون يسد (المقصورات الثلاث الناتجة تتكون من منطقتين التحفيز ومقصورة تنسيق واحدة). خارجيا، بمناسبة مناطق تفضيل اثنين المعينة 6.35 سم من كل من الحاجز الزجاجي المناطق التحفيز "، مما يدل على اثنين من هيئة أطوال 30. تطبيق أقسام مبهمة خارجيا حول ثلاثة جوانب الخزان shoaling، ولكن ترك الجبهة تتعرض للعرض.
ملاحظة: المنطقة تفضيل هذا يمكن أن تكون مخصصة لاختبار فرضيات محددة لأنواع مختلفة الحجم. - تبعا لطبيعة الدراسة، المياه الضحلة التحفيز مختارة حتى يتأقلم لا يقل عن 12 ساعة قبل احتسابه اختبار والبقاء في خزان shoaling طوال فترة التجربة.
ملاحظة: المياه الضحلة التحفيز هي مجموعات من الأسماك الفردية التي تستخدم لتقييم الطريقة التي يتصرف السمك التنسيق في وجود أو عدم وجود هذه المياه الضحلة. يمكن تحديد مختلف مجموعات التحفيز مياه ضحلة لاختبار عدد من الفرضيات shoaling متنوعة. تأكد من أن يتم تناوب المياه الضحلة التحفيز بين كل منطقة حافزا لتجنب التحيز الجانبية، كما يسمح أيضا للتأقلم لا يقل عن 12 ساعة قبل الاختبار. - نقل الأسماك التنسيق في خزان التأقلم كما هو موضح سابقا (راجع الخطوة 3.3)
- نقل، عن طريق الحجامة، والأسماك اتصال من خزان التأقلم المتوسط إلى المقصورة المركزية في خزان shoaling.
- السماح لفترة تأقلم 10 دقيقة قبل 10 دقيقة الحية التهديف فترة المراقبة. بدلا من ذلك، تسجيل المقايسات shoaling ويسجل وقت لاحق باستخدام JWatcher. يتم تحديد الأسماك لتكون shoaling عندما يكونون داخل المنطقة الأفضلية في الغرفةإسكان مياه ضحلة الهدف.
- تحديد الوقت الذي يقضيه في كل منطقة تفضيل والوقت الذي يقضيه في حجم المركز.
- وكإجراء وصفي إضافي، وحساب "قوة shoaling" (SOS). تعيين قيمة بين -1 و +1 حيث يصف حجم كيف غالبا ما تكون المياه الضحلة الأسماك الفردية.
- حساب نسبة الوقت المخصص shoaling مقسوما على مساحة من المناطق shoaling وطرح نسبة من الوقت الذي يقضيه لا shoaling ومنطقة من المناطق غير shoaling. وضع هذه الكمية على مبلغ من الوقت الذي يقضيه في كل منطقة مقسوما على حجم كل منطقة على حدة. ويمكن الاطلاع على مزيد من المعلومات حول هذا الحساب في دراسة سابقة (14).
6. مراقبة جودة البيانات
- تحليل البيانات باستخدام البيانات التقليدية أدوات التحليل 31-32.
- اختبار تجانس التباين باستخدام اختبار اللامعلمية ليفين لجميع السلوكيات. إذا كان السلوك غير متجانسة تؤدي الى تسجيل التحول33.
- تأكد من أن ليس هناك أي آثار تسلسل (أي أن النظام العشوائي لم تؤثر على سلوك الأفراد) باستخدام كروسكال واليس ANOVA على بيانات متجانسة 34.
- تأكد من عدم وجود تحيز الجانب للمقايسة shoaling من خلال خلق النموذج الخطي العام حيد المتغير على مؤشرات SOS مع الجانب كعامل ثابت 35.
ملاحظة: إذا كان هناك قليل من دون مشكلات مع البيانات، ويمكن إجراء التحليلات المصب. إذا كانت هناك قضايا، تصالح مع التحولات إضافية وترشيد مع تفسيرات معقولة بيولوجيا، و / أو زيادة حجم العينة.
7. تحليل البيانات
- حساب اثنين من الذيل سبيرمان رتبة إرتباطات 36 لجميع السلوكيات بشكل منفصل داخل الجرأة والعدوان المقايسات.
- حساب معاملات الارتباط intraclass (ICC) كنموذج مختلط في اتجاهين مع اتساق لفحوصات السلوكية التي أجريت على أكثر من تيمه لإعطاء الفرد 36. في هذا الإطار، والمحكمة الجنائية الدولية لقياس مدى ثبات سمكة تصرف في فحص معين قياس أكثر من مرة واحدة.
- المعالجة المسبقة لجرأة والعدوان السلوكيات التي تركز ووضع النماذج عن السلوكيات للتحضير للمساهمة في تحليل المكونات الرئيسية (PCA) 25.
ملاحظة: تجهيزها القياسات التي تركز ووضع النماذج هي خطوة حيوية. دون هذا تجهيزها السلوكيات خطوة التي تحدث مع تردد أكثر وأكثر بنسب مختلفة سوف تؤثر بشكل مفرط تفسيرات المكونات المستخرجة. فإن عملية تمركز ووضع النماذج إزالة هذا التحيز. - تنفيذ اتفاقية الشراكة والتعاون مع مصفوفة الارتباط لتحديد ما إذا ترتبط الجرأة والعدوان معا متلازمة سلوكية. تفسير التحميل السلوكية لكل مهمة عنصر في> 0.6. انظر Budaev 2010 24 للحصول على دليل شامل للإبلاغ عن محكمة التحكيم الدائمة للدراسات سلوكية. وهناك مؤامرة حصاة يكون بالمعلومات التي eigenveيجب أن تبقى ctors للتفسير.
- باستخدام حزمة البرامج الإحصائية مثل R أو SPSS 31،32 استخراج عشرات لكل مكون لكل فرد. تمثل عشرات كم يمكن تفسير سلوك شخص معين من قبل مكون معين.
- حساب الارتباطات رتبة سبيرمان بين درجات الانحدار عامل وقوة shoaling 36.
ملاحظة: يعتبر متلازمة سلوكية موجودة إذا تحميل الجرأة والعدوانية السلوكيات على نفس العنصر، أو إذا كان أي عنصر مع التحميل التأويل كبيرة يرتبط مع قوة shoaling. أيضا، لاحظ أن قوة shoaling غير مدرجة في اتفاقية الشراكة والتعاون للسماح للتفسيرات أفضل من التحديد الكمي السلوكية أكثر تعقيدا (جرأة والعدوان). واتفاقية الشراكة والتعاون انهيار متعامد الجرأة ويتميز العدوان إلى المتجهات الذاتية لتحقيق أقصى قدر من التباين أوضح وهي مناسبة تماما لهذه القياسات المعقدة. تفسيرالناتج المتجهات الذاتية وتتراجع قوتنا من القياسات shoaling على كل واحد منهم يعطي تفسيرا أكثر سهولة بكثير من كيف أن كل من السلوكيات المعقدة (جرأة والعدوان) تتصل قياس shoaling الثنائية أكثر تحديدا جيدا (أي الأسماك shoaling أو لا shoaling).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تبعا لطبيعة الدراسة، وبروتوكول معين العاملين، عدة نتائج مميزة ممكنة في تجربة المتلازمات السلوكية. الجداول والأرقام، حيث أشار التالية، يتم تكييفها من دراستنا السابقة التي نشرت في دورية السلوكي العمليات (14) ومجلة الزرد 17. عندما يتم تنفيذ الاقتراح (كما هو موضح أعلاه) في مجملها، مجموعتين من النتائج، "في إطار العلاقات المتبادلة فحص" و "بين الارتباطات الفحص،" من المتوقع (الشكل 1).
أول مجموعة من النتائج يصف ضمن الاتساق الفحص. على وجه التحديد، تصف النتائج كيف السلوكيات ترتبط مع بعضها البعض ضمن الفحص جرأة وداخل فحص العدوان على حدة. الجدولين 1 و 2 وصف ما هذه الارتباطات يجب أن تبدو لجرأة وAGيتم تكييفها المقايسات زيحان خلفي والبيانات المقدمة من دراسة سابقة 14. للمقايسة جرأة، ومن المتوقع أن عددا من التحولات والوقت الذي يقضيه في الجزء العلوي من الخزان ترتبط بشكل إيجابي، ولكن الكمون لدخول الجزء العلوي يرتبط سلبا. نتائج ممثل للأفراد يقاس على المحور جرأة السلوك في خزان جرأة (راجع الخطوة 4.1) وترد في الجدول 1. لمقايسة العدوان، ومن المتوقع أن لدغ، ويعرض الجانبية، والوقت الذي يقضيه بالقرب من المرآة هي مرتبطة فقط. نتائج ممثل للأفراد يقاس على محور العدوان السلوك في خزان العدوان (راجع الخطوة 3.1) وترد في الجدول 2. لا ترتبط السهام عادة مع السلوك العدواني على الرغم من أنه في بعض الحالات، الأسماك عدائية تميل إلى وثبة (وبالتالي وجود علاقة سلبية ). وأخيرا، وقوة قياس Shoaling (SOS) لفحص shoaling توفر مقياسا على المستوى الفردي من shoaling رendency. Shoaling هو السلوك تكرار للغاية عبر مجموعة متنوعة من فحوصات shoaling عندما تقاس باستخدام SOS (ICC = 0.641) 14 والعديد من دراساتنا السابقة قد أكدت السلوك shoaling في الزرد 23،38. منذ سيتم قياس جميع الأفراد لكل من السلوكيات، يمكننا حساب الارتباطات سبيرمان عبر هذه السلوكيات، ونتوقع بعض السلوكيات إلى أن يرتبط، على النحو المحدد لالزرد في نتائج تمثيلية.
الجزء الثاني من نتائج يحقق وجود متلازمة سلوكية. وتتلخص نتائج التحليل التكاملي لجميع السلوكيات كميا في المقايسات الجرأة والعدوان السلوكية يستخدم مدير تحليل مكونات (PCA). ينبغي أن يكون هناك 2-4 مكونات التأويل على أساس التحميل عالية لكل سلوك. إذا كان بالمتجه الذاتي واحد أن يفسر جزءا كبيرا من الاختلاف يشمل السلوكيات من كل من جرأةد المقايسات العدوان، ثم لوحظ متلازمة سلوكية. ومع ذلك، إذا السلوكيات من الجرأة والعدوان المقايسات لا تتداخل على بالمتجه الذاتي واحد، ثم الدراسة لا تصف متلازمة سلوكية. يتم عرض نتائج ممثل لعدم وجود متلازمة سلوكية الجرأة-العدوان (الشكل 2). في هذا المثال، عنصر 1 هو الأكثر تمثيلا قويا من السلوكيات العدوانية بينما العنصر 2 ويرتبط بشدة مع السلوكيات جرأة. لأنه لم يتم تمثيل العدوان والجرأة السلوكيات من قبل نفس المكون، يمكن الاستنتاج أن هناك عدم وجود متلازمة سلوكية الجرأة-العدوان (ناقلات جرأة متعامدة تقريبا ناقلات العدوان). أيضا، لا تتأثر هذه السلوكيات عن طريق الجنس لنمط التوزيع هو نفسه بين الذكور والإناث. لمراقبة إذا ترتبط الجرأة أو العدوان السلوكيات مع shoaling، وعشرات من الانحدار المستخرجة لكل الأسماك نيوسمعجبا مع قياس SOS للأسماك. ومن المهم التأكد من أن أي مكونات الربط ويصف في الواقع مجموعة للتفسير السلوكيات. إذا كان هناك ارتفاع المطلقة الارتباطات قيمة سبيرمان بين أي مكون وقياس shoaling، ثم متلازمة سلوكية shoaling موجودة. بغض النظر عن نتائج محددة، فمن المهم توفير التفسيرات البيولوجية الممكنة لجميع الملاحظات. وتقدم ممثل النتائج للحصول على وصف متلازمة السلوكية shoaling جرأة (الجدول 3) 14. بينما تمثل البيانات المقدمة نتائج نموذجية لالزرد، لا ينبغي أن تفسر على أنها قياسات جودة البيانات. هناك العديد من الأسباب التي تجعل البيانات سوف تبدو مختلفة عبر تجارب مختلفة مثل الأنواع أو الاختلافات السكان.
الشكل 1. المقترحةوترد سير العمل لجرأة، والعدوان، وshoaling التجربة المتلازمات السلوكية. القياسات النموذجية لكل فحص. الخطوط العريضة لكيفية تحليل فحوصات بشكل فردي ومن ثم كيفية دمج التحليلات يتم سرد أيضا. الرجاء النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. ممثل النتائج لمحكمة التحكيم الدائمة مما يدل على أن متلازمة سلوكية جرأة الاعتداء غائبة، وناقلات الحمراء تشير السلوكيات التي تساهم في عشرات عنصر (يسار وأسفل المحاور) ونقاط تمثل عشرات الفردية على طول كل مكون (يمين وأعلى محاور ). ويمثل الذكور بنسبة نقطة زرقاء ويتم تمثيل الإناث من النقاط الخضراء. لاحظ أن "سلوك خاطئ" تشير إلى "السهام" و"معدل العدوان" يمكن حسابها عن طريق إضافة عدد من لدغات ويعرض الجانبية مقسوما على إجمالي الوقت التفاعل مع مرآة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| التحولات | كمون | لعبة الرشق بالسهام | ||||
| ᴩ | ص | ᴩ | ص | ᴩ | ص | |
| الوقت السطح | 0.65 | <0.001 * | -0.68 | <0.001 * | 0.42 | 0.007 * |
| التحولات | -0.40 | 0.012 * | 0.33 | 0.041 * | ||
| كمون | -0.47 | 0.002 | ||||
| * α <0.05 |
الجدول 1: الجرأة سبيرمان الارتباطات رتبة في فحص خزان الرواية قد تم تعديل هذا الجدول من الطريق وآخرون، 2015.
| عرض الجانبية | لعبة الرشق بالسهام | مرآة الوقت | ||||
| ᴩ | ص | ᴩ | ص | ᴩ | ص | |
| لدغات | 0.69 | <0.001 * | -0.10 | 0.547 | 0.63 | <0.001 * |
| يعرض الجانبية | -0.06 | 0.735 | 0.66 | <0.001 * | ||
| لعبة الرشق بالسهام | -0.18 | 0.285 | ||||
| * α <0.05 | ||||||
الجدول 2: العدوان سبيرمان الارتباطات رتبة في فحص خزان الرواية قد تم تعديل هذا الجدول من الطريق وآخرون، 2015.
| ᴩ | ص | |
| مكونات PCA | ||
| جرأة | 0،339 | 0.035 * |
| عدوان | 0.075 | 0.65 |
| وثبة | -0.012 | 0.944 |
تي قادرة 3: استخدام مكونات PCA لتأكيد وجود shoaling والجرأة متلازمة سلوكية موجودة في هذه الفئة من السكان قد تم تعديل هذا الجدول من الطريق وآخرون، 2015.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
فإن بروتوكول تحديد ما إذا كان هناك جمعيات متسقة في الجرأة والعدوان والسلوكيات shoaling في الزرد. إذا هناك جمعيات متسقة في عدد معين من السكان بين أي من هذه السلوكيات، ثم متلازمة سلوكية موجودة. من خلال دراسة متلازمة السلوكية الطبيعية والسكان، يمكن للباحثين لديهم فهم أكثر اكتمالا من ديناميكية لها السلوكية، التركيبة السكانية، وربما التاريخ التطوري 3. وعلاوة على ذلك، والتلاعب البيئة التي تؤثر على هذه المتلازمات السلوكية، كما هو الحال في علم الصيدلة 6، وعلم السموم 7، وعلم الوراثة السلوكي 8،9، وأمراض الغدد الصماء 10 دراسات، يمكن أن تسلط الضوء على كيف يمكن أن تؤثر عوامل مختلفة جمعيات السلوكية. تكوين محدد من متلازمة سلوكية اعتداء جرأة-shoaling وجدت في هذا البروتوكول يشمل السلوكيات المشتركة مدروسة في نموذج حي الزرد 11-13. في حين أن هذا المنهجيمكن تطبيقها على أي نوع من الأسماك، وتطبيق واسع لاستخدام الزرد قد تساعد في توحيد متعدد التخصصات من هذا البروتوكول. كل فحص المذكورة أعلاه يمكن السيطرة عليها بسهولة أكبر والتلاعب بها من تقنيات أخرى مماثلة. على سبيل المثال، يستخدم فحص العدوان المرآة تميل إلى إثارة مجموعة أوسع من الردود العدوان بدلا من استخدام نموذج حي أو الطين، التحفيز فيديو، أو صورة طبق الأصل العمودية التحفيز 17. وكميا السلوكيات يقاس في فحص جرأة أكثر سهولة مما كانت عليه في تي متاهة أو اختبار ميداني كبير مفتوح 15. وأخيرا، ووصف الفحص shoaling يمكن بسهولة تتبع الفرد، وهو أمر ضروري لدراسة المتلازمات السلوكية على المستوى الفردي، ويمكن أن تسمح لمجموعات غير محدودة من المياه الضحلة الهدف من طرح الأسئلة التجريبية الجديدة. في حين أن هذا البروتوكول يمكن تعديلها لاستيعاب مجموعة متنوعة من الأسئلة السلوكية، وتوحيد أنه قد يؤدي إلى مزيد من التبصر في كيفية الحمض النووي، وآلية الخلويةيمكن أن الصورة والتنمية الخلوية، وعرض المواد الكيميائية تؤثر المتلازمات السلوكية الفردية والسكان.
من أجل أن تكون على ثقة من أن الجمعيات احظ صحيحة، يجب اتباع البروتوكول بعناية. بالنسبة للجزء الاكبر، وبروتوكول للتعديل وفقا لفرضية محددة؛ ومع ذلك، هناك العديد من الخطوات التي يجب تنفيذها لضمان الثقة في النتائج. أولا، من المهم أن الأفراد ويعيش في دبابة المناسب، في الظروف المثلى (انظر البروتوكول) ويتم تغذية بشكل صحيح. يجب أن تكون الشروط المياه المستمر في رفوف السكن والدبابات التأقلم، والدبابات الاختبار. إذا كان الماء غير متناسقة، فإن الأسماك يستغرق وقتا أطول للتأقلم مع الظروف، ولن يتم القبض على القياسات السلوكية بشكل صحيح. ومن المهم أيضا أن المياه المعاد تدويرها بين الجرأة والعدوان الدبابات بحيث لا يتم تنفيذ الروائح الاصطناعية فوق بين المقايسات. ثانيا، فإنه من الأهمية بمكان أن جميع behavوسجل iors بشكل صحيح. لضمان ذلك، بتصوير جميع المقايسات للسماح المراقبات متعددة، ولعدة فرص التدريب. هداف تدريب واحد يمكن أن تقيس بدقة سلوك الأسماك، ولكن التدريب يستغرق بعض الوقت. إذا تم تجاهل فترة التدريب متأنية، ثم الثقة من نتائج الدراسة السلوكية منخفضة. دراسة متأنية مع أحجام عينة المنخفضة التي يقوم بها مراقب المدربين تدريبا جيدا أقوى من دراسة مع حجم عينة عالية يؤديها مراقب مدربين تدريبا جيدا. وأخيرا، مراقبة جودة البيانات التي تم جمعها أمر بالغ الأهمية أيضا. الخطوات التي يتم اتخاذها لبطريقة عشوائية الأفراد، وإزالة التحيزات ينبغي أن يؤدي إلى بيانات قابلة للاستعمال، يمكن الاعتماد عليها، وينصح التحولات بيانات لتجهيزها وفقا لاختبار إحصائي محدد (انظر البروتوكول). إذا لم تتم بعناية هذه الخطوات، الناتج من التحليلات قد لا تكون للتفسير موثوق.
كما ذكر سابقا، فإن الأسلوب هو accordi للتعديل بشكل كبيرنانوغرام لاختبار الفرضيات المحددة. وتوجد قياسات السلوكية الأخرى التي يمكن أن يتم التحقيق يجب أن تكون متصلة في متلازمة سلوكية بين عدد من أنواع الأسماك المتنوعة 39-41. في حين أن مبادئ البروتوكول لا تزال هي نفسها، والأسئلة المحددة يمكن تغييرها بسهولة للسماح لاختبار فرضية متنوعة. على سبيل المثال، قد يستخدم الباحث البروتوكول المذكور لاختبار وجود عدوان ومتلازمة سلوكية النشاط الاستكشافي في البلطي المدان (Amatitlania nigrofasciata). والسؤال هو ذات الصلة، ولكن الكائن الدراسة يختلف عن وصفها من قبل البروتوكول. ومع ذلك، لا تزال الخطوات العامة إلى حد كبير نفس. يجب أن تكون عشوائية الأفراد وتتبعها من خلال سلسلة من فحوصات، مع فترات التأقلم بين المقايسات، يجب أن يكون الماء ثابت وجديدة، وينبغي تدريب للعالم بشكل صحيح. احد الفرق الرئيسي هو السلوكيات التي يجري قياسها قابلة للتغيير وفقا لSPECIالمرورية الفحص، والجمعيات السلوكية قد تتغير وفقا لأنواع محددة والبيئة الأصلية.
وترتبط قيود البروتوكول مع بعض الشكوك التقليدية من الدراسات السلوكية. على وجه التحديد، إذا سجل فحوصات غير موثوق فمن المرجح تفسيرات النتائج الخاطئة، وسيكون من الصعب تحديد هذا الخطأ. للتغلب على هذا القيد، فمن الممكن أن اثنين من الهدافين المدربين تدريبا جيدا مراقبة السلوكيات. لتقييم موثوقيتها، وحساب معاملات الارتباط intraclass على قياسات تطبيقها على نفس السمك، وإذا لزم الأمر، وضبط الاختلافات. بدلا من ذلك، إن وجدت، والبرمجيات التتبع التلقائي مثل Ethovision يمكن تنفيذها والتحقق من صحتها من قبل مراقب المدربين تدريبا جيدا لزيادة الإنتاجية ودقة 42. وعلاوة على ذلك، هناك تفسيرات مختلفة ممكنة بشأن تسمية والتهديف من السلوكيات "الجرأة". دراسات أخرىوقد وصف وصف السلوك 43 وووصف آخرون السلوك "الاستكشافية" 44،45. في عملنا وصفت سلوك ب "جرأة" حيث تم قياس السلوك في بيئة غير مألوفة للفرد البؤري. ومع ذلك، في حين أن العبارة قد تكون عرضة لتفسيرات بديلة، وهذا لا يؤثر على البروتوكول أو التحليل. بالإضافة إلى ذلك، في حين نتوقع القياسات في الجرأة والعدوان المقايسات أن ارتبط بقوة ضمن مجموعة من السكان، فإن من المحتمل أن تكون بعض الحالات من الأقل إلى عدم وجود ارتباط بعض السلوكيات. والتغلب على هذا القيد من قبل قوة من اتفاقية الشراكة والتعاون، لأنه المفاتيح في يوم من المصادر الهامة للتقلب، وحتى لو لم يكن هناك ارتباط القياسات، فإن التحليل استخراج الاختلاف في السلوك ثابت في البيانات التي تم جمعها. وأخيرا، كما هو الحال مع جميع الأساليب العلمية، إذا تم اعتماد بروتوكول عالميا وويتم باستمرار من قبل العديد من المختبرات، وهناك بعضغير متوقع، الخلط غير مقاس قدمه البروتوكول، ثم استمر هذا العنصر الضار المحتمل في الأدب، ويصبح من الصعب تفكيك. تؤكد الصيدلانية أن مجموعة تمثيلية من المقايسات تثير استجابة سلوكية تهدف يتطلب فهم أشمل من الاستجابات السلوكية والعصبية والهرمونية. يمكن متلازمات سلوكية تساعد في تفسير أساس السلوك، ولكن هذا القيد مختبر قد تكون قادرة على أن تكون موجهة بشكل أكثر انتظاما في الدراسات المستقبلية. ومع ذلك، فقد تم توفير النتائج من صحة استخدام هذا البروتوكول في الزرد، و، مع بعض التعديلات المناسبة، ويمكن تمديد بروتوكول لمجموعة متنوعة من الفرضيات في عدد من أنواع الأسماك المختلفة. باتباع بعناية بروتوكول مفصلة للإسكان، واختيار واختبار معايير مختلفة سلوكيا وتمكين الباحثين من إجراء مقارنات أكثر تحديدا عبر مجموعة واسعة من الدراسات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zebrafish Rack System | Aquaneering Inc | Cat. # ZS550 | |
| Pet Valu Tropical Fish Food, 224.0 g | Pet Valu | Cat. # 31700 | |
| Premium Grade Brine Shrimp Eggs, 16 oz | Brine Shrimp Direct | ||
| 1.5 L Trapezoidal Tank | Pentair Aquatic Ecosystems | Cat. # itsts-a | |
| 19 L rectangular tank | That Fish Place | 211932 | |
| 76 L rectangular tank | That Fish Place | 212180 | |
| Hitachi KP-D20A CCD Camera | Prescott's, Inc. | ||
| Nikon AF Nikkor 35-105 mm f/305~4.5s MACRO lens | Nikon Corporation | ||
| ArtMinds Square Mirror, Value Pack 3" x 3" | Michaels | Cat. # 10334162 | |
| Jwatcher | |||
| SPSS Statistics Base | IBM | ||
| R | The R Foundation |
References
- Huntingford, F. The relationship between anti-predator behaviour and aggression among conspecifics in the three-spined stickleback, Gasterosteus aculeatus. Anim Behav. 24, 245-260 (1976).
- Réale, D., Reader, S. M., Sol, D., McDougall, P. T., Dingemanse, N. J. Integrating animal temperament within ecology and evolution. Biol Rev. 82 (2), 291-318 (2007).
- Sih, A., Bell, A., Johnson, J. C. Behavioral syndromes: an ecological and evolutionary overview. Trends Ecol Evol. 19 (7), 372-378 (2004).
- Conrad, J. L., Weinersmith, K. L., Brodin, T., Saltz, J. B., Sih, A. Behavioural syndromes in fishes: a review with implications for ecology and fisheries management. J Fish Biol. 78 (2), 395-435 (2011).
- Wolf, M., Weissing, F. J. Animal personalities: consequences for ecology and evolution. Trends Ecol Evol. 27 (8), 452-461 (2012).
- Langheinrich, U. Zebrafish: a new model on the pharmaceutical catwalk. BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).
- Dai, Y. -J., Jia, Y. -F., et al. Zebrafish as a model system to study toxicology: Zebrafish toxicology monitoring. Environ Toxicol Chem. 33 (1), 11-17 (2014).
- Norton, W., Bally-Cuif, L. Adult zebrafish as a model organism for behavioural genetics. Neuroscience. 11 (1), 90 (2010).
- Gerlai, R. Zebra fish: an uncharted behavior genetic model. Behav Genet. 33 (5), 461-468 (2003).
- Dzieweczynski, T. L., Campbell, B. A., Marks, J. M., Logan, B. Acute exposure to 17α-ethinylestradiol alters boldness behavioral syndrome in female Siamese fighting fish. Horm Behav. 66 (4), 577-584 (2014).
- Miklòsi, Á, Andrew, R. J. The Zebrafish as a Model for Behavioral Studies. Zebrafish. 3 (2), 227-234 (2006).
- Zebrafish protocols for neurobehavioral research. , Humana Press. New York. (2012).
- Moretz, J. A., Martins, E. P., Robison, B. D. Behavioral syndromes and the evolution of correlated behavior in zebrafish. Behav Ecol. 18 (3), 556-562 (2007).
- Way, G. P., Kiesel, A. L., Ruhl, N., Snekser, J. L., McRobert, S. P. Sex differences in a shoaling-boldness behavioral syndrome, but no link with aggression. Behav Process. 113, 7-12 (2015).
- Toms, C. N., Echevarria, D. J., Jouandot, D. J. A methodological review of personality-related studies in fish: Focus on the shy-bold axis of behavior. J Comp Psychol. 23, 1-25 (2010).
- Rowland, W. J. Studying visual cues in fish behavior: A review of ethological techniques. Environ Biol Fish. 56 (3), 285-305 (1999).
- Way, G. P., Ruhl, N., Snekser, J. L., Kiesel, A. L., McRobert, S. P. A Comparison of Methodologies to Test Aggression in Zebrafish. Zebrafish. 12 (2), 144-151 (2015).
- Moss, S., Tittaferrante, S., et al. Interactions between aggression, boldness and shoaling within a brood of convict cichlids (Amatitlania nigrofasciatus). Behav Process. 121, 63-69 (2015).
- Ruhl, N., Kiesel, A. L., McRobert, S. P., Snekser, J. L. Behavioural syndromes and shoaling: connections between aggression, boldness and social behaviour in three different Danios. Behaviour. 149 (10-12), 1155-1175 (2012).
- Larson, E. T., O'Malley, D. M., Melloni, R. H. Jr Aggression and vasotocin are associated with dominant-subordinate relationships in zebrafish. Behav Brain Res. 167 (1), 94-102 (2006).
- McRobert, S., Bradner, The influence of body coloration on shoaling preferences in fish. Anim Behav. 56 (3), 611-615 (1998).
- Ruhl, N., McRobert, S. The effect of sex and shoal size on shoaling behaviour in Danio rerio. J Fish Biol. 67 (5), 1318-1326 (2005).
- Snekser, J., Ruhl, N., Bauer, K., McRobert, S. The influence of sex and phenotype on shoaling decisions in zebrafish. J Comp Psychol. 23, 70-81 (2010).
- Blumstein, D. T., Evans, C. S., Daniel, J. C. JWatcher. , Available from: http://www.jwatcher.ucla.edu/ (2006).
- Budaev, S. V. Using Principal Components and Factor Analysis in Animal Behaviour Research: Caveats and Guidelines. Ethology. 116 (5), 472-480 (2010).
- Paciorek, T., McRobert, S. Daily variation in the shoaling behavior of zebrafish Danio rerio. Curr Zool. 58 (1), 129-137 (2012).
- Haahr, M. Sequence randomiser. , Available from: http://www.random.org/lists/ (1998).
- Wright, D., Krause, J. Repeated measures of shoaling tendency in zebrafish (Danio rerio) and other small teleost fishes. Nat Protoc. 1 (4), 1828-1831 (2006).
- Cachat, J., Stewart, A., et al. Measuring behavioral and endocrine responses to novelty stress in adult zebrafish. Nat Protoc. 5 (11), 1786-1799 (2010).
- Croft, D. P., Krause, J., Couzin, I. D., Pitcher, T. L. When fish shoals meet: outcomes for evolution and fisheries. Fish Fish. 4, 138-146 (2003).
- IBM Corp. IBM SPSS Statistics for Mac OS. , IBM Corp. Armank, NY. Available from: http://www.ibm.com/analytics/us/en/technology/spss/spss.html (2011).
- R: A language and environment for statistical computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. Available from: http://www.R-project.org (2013).
- Brown, M. B., Forsythe, A. B. Robust Tests for the Equality of Variances. J Am Stat Assoc. 69 (346), (1974).
- Kruskal, W. H., Wallis, W. A. Use of Ranks in One-Criterion Variance Analysis. J Am Stat Assoc. 47 (260), 583-621 (1952).
- Nelder, J. A., Wedderburn, R. W. M.
- Iman, R. L., Conover, W. J. A distribution-free approach to inducing rank correlation among input variables. Commun Stat Simulat. 11 (3), 311-334 (1982).
- Fleiss, J. L., Cohen, J. The Equivalence of Weighted Kappa and the Intraclass Correlation Coefficient as Measures of Reliability. Educ Psychol Meas. 33 (3), 613-619 (1973).
- Ruhl, N., McRobert, S. P., Currie, W. J. S. Shoaling preferences and the effects of sex ratio on spawning and aggression in small laboratory populations of zebrafish (Danio rerio). Lab Animal. 38 (8), 264-269 (2009).
- Bell, A. M. Behavioural differences between individuals and two populations of stickleback (Gasterosteus aculeatus). J Evolution Biol. 18 (2), 464-473 (2005).
- Wilson, A. D. M., Godin, J. -G. J. Boldness and behavioral syndromes in the bluegill sunfish, Lepomis macrochirus. Behav Ecol. 20 (2), 231-237 (2009).
- Brodin, T. Behavioral syndrome over the boundaries of life--carryovers from larvae to adult damselfly. Behav Ecol. 20 (1), 30-37 (2008).
- Noldus, L. P., Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A. EthoVision: a versatile video tracking system for automation of behavioral experiments. Behav Res Methods Instrum Comput. 33 (3), 398-414 (2001).
- Cote, J., Fogarty, S., Weinersmith, K., Brodin, T., Sih, A. Personality traits and dispersal tendency in the invasive mosquitofish (Gambusia affinis). Proc R Soc B. 277 (1687), 1571-1579 (2010).
- Fraser, D. F., Gilliam, J. F., Daley, M. J., Le, A. N., Skalski, G. T. Explaining leptokurtic movement distributions: intrapopulation variation in boldness and exploration. Am Nat. 158 (2), 124-135 (2001).
- Dingemanse, N. J., Wright, J., Kazem, A. J. N., Thomas, D. K., Hickling, R., Dawnay, N. Behavioural syndromes differ predictably between 12 populations of three-spined stickleback. J Anim Ecol. 76 (6), 1128-1138 (2007).
