Waiting
Elaborazione accesso...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Safra Yolunun İnternalasyonunu İncelemek İçin Bir Tam Montajlı İmmünohistokimyasal Yöntem Kullanmak Published: June 15, 2017 doi: 10.3791/55483
Automatic Translation
1, 1, 2, 1, 2, 3, 3, 1
1Department of Frontier Health Sciences, Graduate School of Human Health Sciences, Tokyo Metropolitan University, 2Department of Anatomy, Tokyo Medical University, 3Area of Regulatory Biology, Division of Life Science, Graduate School of Science and Engineering, Saitama University

Summary

Sunkus murinustaki ekstrahepatik safra yolundaki nörofilament protein ekspresyonunu görselleştirmek için bütünüyle monte edilen bir immünohistokimyasal yaklaşım . Burada sunulmaktadır. Bu protokol, S. murinus veya diğer türlerdeki tüm iç organların innervasyonunu analiz etmek için kullanılabilir.

Abstract

Bu çalışma, tüm montaj immünohistokimyası boyama yöntemini detaylı olarak anlatmaktadır; nörofilament protein antikoru, Sunci murinus ( S. murinus) ' daki safra yolunun innervasyonunu etiketlemek için kullanmaktadır   ). İlk olarak, numune S. murinus'dan ayrılmış ve% 4 paraformaldehitle (PFA) sabitlenmiştir. İkincisi, bir enzimatik tedavi ve potansiyel endojen peroksidaz inaktivasyonu gerçekleştirildi. Sonra, numune birincil antikor anti-nörofilament protein antikoruna 3-6 gün maruz bırakılmıştır. Ardından, yaban mersini peroksidazı ile konjuge edilmiş ikincil antikor ile inkübe edildi. Renk reaksiyonu, numunenin bir 3,3'-diaminobenzidin (DAB) substratı ile reaksiyona sokulmasıyla ortaya çıkmıştır. Bu yöntem bütün iç organların innervasyonunu analiz etmek için uygulanabilir. Ayrıca, bu protokol, diğer nöronal antikorları test etmek için de adapte edilebilir, ancak antibodilerin optimizasyonuEsler önce yapılmalıdır. Bu yöntem başlangıçta Kuratani ve Tanaka tarafından tanıtıldı 1 , 2 , 3 .

Introduction

Ev sinek fıtığı , Suncus murinus , Insectivora ve Soricidae ailesine aittir. Bu minik memeli, Güneydoğu Asya'da dağılmıştır ve insan yerleşim yerleri veya sığır kalemlerinin yakınında bulunan evlere ve çimenlik alanlara yerleşmiştir. Bu tür, fare, sıçan ve tavşan gibi diğer laboratuar hayvanlarına göre insanlara daha fazla benzeyen genel morfolojik özellikleri sergilemektedir. Daha önce, pankreas 6 , büyük duodenal papilla 7 , pilor 8 , safra kesesi 5 ve ekstrahepatik safra yolu 9'daki periferik sinirleri etiketlemek için S. murinus nevrofilament proteini (NFP) için bir periferik nöron işaretleyici ile birlikte tümüyle bağlanan immün boyama yapıldı.

NFP olgun nöronal hücre iskeletinin bir parçası olan makromoleküler bir kompleksdir. Nörofilamanla ilgili proteinNFP ve zigosom arasındaki etkileşime aracılık eder. Hem enzim fonksiyonu hem de bağlayıcı proteinlerin yapısı NFP 10 tarafından düzenlenir. NFP kompleksi üç polipeptidden oluşur: NF-L (70 kDa), NF-M (150-160 kDa) ve NF-H (200 kDa). NFP hem merkezi hem de periferik sinir sisteminde nöronal aksonlarda bulunabilir. Anti-insan NFP antikorunun, merkezi ve periferik sinir sisteminin aksonlarını işaret ettiği gösterilmiştir. Anatomik ve elektrofizyolojik araştırmalar sfinkter, safra kesesi ve proksimal gastrointestinal sistemin 11 , 12 , 13 , 14'e bağlı olduğunu göstermiştir. Bununla birlikte, nöronal bağlantılarının morfolojik özellikleri henüz tanımlanmamıştır.

Bu çalışma, S. murinus bil'in innervasyonunu etiketlemek için tam monte bir immünohistokimyasal boyama yönteminin kullanılmasını göstermektedirBir NFP antikoru ile birlikte.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Tüm deneysel prosedürler Tokyo Büyükşehir Belediyesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı. Hayvanlar, Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu ve Kanada Hayvan Bakımı Konseyi Deney Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu uyarınca muhafaza edildi ve işlendi . Japonya'nın Tokyo Büyükşehir Belediyesi Sınır Sağlık Bilimleri Bölümü Fonksiyonel Morfoloji Laboratuvarı'nda yetiştirilen ve bakımını sürdürdükleri hayvanları kullandık.

1. Hayvan Bakımı ve Konut

  1. Kapalı yetiştirme kolonisinden 7 S. murinus (3 kadın ve 70-90 g ağırlığında 4 erkek) elde edin.
  2. S. murinus'u, kağıt şeritleri içeren ahşap yuva kutusuna sahip plastik kafeslerde sütten kesildikten (doğumdan 20 gün sonra) ayrı ayrı tutun. Onları geleneksel şartlara sahip bir hayvan odasında tutun: 23-27 ° C, nem kontrolü yok ve 12:12 saatlik ışık: karanlık döngü. Ticari olarak tedarikAlabalık topakları ve su ad libitum.

2. Doku Hazırlama

  1. % 4 (w / v) paraformaldehid (PFA) hazırlamak için, 40 mL PFA'nın 1,000 mL 0.01 M Fosfat Tamponlu Tuzu içinde (PBS, pH 7.4) çözündürülmesi. Duman kabininde, solüsyon berrak oluncaya kadar bir girdap kullanarak karıştırın. 4% PFA O / N'yi 4 ° C'de saklayın.
    Dikkat: PFA kullanırken uygun Kişisel Koruyucu Ekipmanları (PPE) giyin.
  2. Hayvanı perfüze ile tamir etmek için eteri anesteziyle eter ile inceltin ve daha sonra intraperitoneal bir somnopentil enjeksiyonu yapın (pentobarbital sodyum, 0.6 mL / kg vücut ağırlığı).
  3. Hayvan tamamen uyuşturulduktan sonra, 3 cm uzunluğunda bir orta hat abdominal insizyon oluşturarak bisturi ile karın boşluğunu açın. İnferior vena kava çıkartılarak inceltilirken, bu arterin bifurkasyonunun hemen üzerindeki iliyak arterlerin hemen üstündeki seviyede abdominal aorta retrograd olarak bir kateter takın.
  4. Somnopentil enjekte edin (pentobarbital yaniDium, 1.0 mL / kg vücut ağırlığı). Ötenazi sona erdikten sonra, bir duman dolabında 0.01 M PBS (pH 7.4) ve daha sonra% 4 PFA ile seyreltin.
  5. Perfüzyondan sonra, kan damarlarını etiketlemek için 2-3 mL beyaz neopren lateks (distile Su (DW) ile seyreltik beyaz neopren lateks 3: 2) enjekte edin.
  6. Karaciğer, safra kesesi, safra kanalları, duodenum ve pankreas en blokları dahil olmak üzere karın organlarını ilgili sinir ve damarlarla çıkarın.
  7. Safra kesesine yaklaşık 0.1 mL mavi neopren lateks (mavi mürekkeple 10 mL inceltilmiş beyaz neopren lateks ekleyin) enjekte ederek safra sistemi etiketleyin.
  8. Tam monte immün boyama için 4 ° C'de% 4'lük PFA ile gece boyunca düzeltme yapın.
    Dikkat: PFA toksiktir. PFA'yı doğrudan kullanmaktan kaçının. PFA, duman kabininde kullanılmalıdır.

3. Bütün montaj immünohistokimyası

Not: Yıkama, antikor inkübasyonu ve renklendirme de dahil olmak üzere protokol boyuncaE numune besleyici üzerinde kalmalı, nazikçe oda sıcaklığında veya 4 ° C'de salınmalıdır .

  1. Gün 1: Enzimatik tedavi ve potansiyel endojen peroksidazın inaktivasyonu
    1. Hazırlanan örneği DW 4x ile uygun bir boyutta cam flakon içerisinde 1 saat süreyle oda sıcaklığında yıkayın. PFA'yı çıkarmak için numuneyi nazikçe sallayın. Çözüm alışverişi yaparken numuneye zarar vermemek.
    2. % 1 (w / v) ortoperiodik asit hazırlamak için 1 g ortoperiodik asit 100 mL DW'de eritilir.
    3. Entrensek peroksidaz reaksiyonunu önlemek için numuneyi oda sıcaklığında 20 dakika boyunca% 1 ortoperyodik asit ile inkübe edin.
    4. 0.004 g papainin, 100 mL 0.025 mol / L Tris-HC1 tamponunda (pH 7.6) çözülmesi ile% 0.004 (w / v) papain hazırlayın.
    5. Numuneyi oda sıcaklığında 10 dakika oda sıcaklığında yıkayın.
    6. Örnek, yeni hazırlanmış% 0.004 papain içinde 37 ° C'de 2 saat süreyle hafifçe sallanan bir sabit sıcaklık banyosunda inkübe edin.
    7. Numuneyi D ile yıkayınOda sıcaklığında 50-60 dk.
    8. Numuneyi 4 ° C / N'de% 4 PFA içinde saklayın.
  2. 2. Gün: Enzimatik tedavi
    1. Elde edilen numuneyi 1 saat boyunca oda sıcaklığında DW ile 4 kez yıkayın.
    2. Örnek, yeni hazırlanmış% 0.004 papain içinde 37 ° C'de 2 saat süreyle hafifçe sallanan bir sabit sıcaklık banyosunda inkübe edin.
    3. Numuneyi oda sıcaklığında 50-60 dakika oda sıcaklığında yıkayın. Numuneyi 4 ° C / N'de% 4 PFA içinde saklayın.
  3. 3. Gün: Dondurma tedavisi
    1. Depolanmış numuneyi, yukarıdaki gibi RT'de 1 saat boyunca DW 4x ile yıkayın.
    2. 2.5 g, 5 g ve 10 g sakrozun sırasıyla 100 mL 0.01 M PBS'de çözülmesi ile% 2.5 (w / v),% 5 (w / v) ve% 10 (w / v) sukroz hazırlayın PH 7.4).
    3. Numuneyi, her biri 30 dakika boyunca% 2.5 (w / v),% 5 (w / v) ve% 10 (w / v) sakroz içine daldırın.
    4. Numuneyi -20 ° C'de 30-60 dakika boyunca dondurun ve sonra oda sıcaklığında tam olarak çözündürün; Döngüyü 3x tekrarlayın.
    5. Üst% 2 Triton X-100 (v / v), 100 mL 0.01 M PBS'ye (pH 7.4) 2 mL Triton X-100 ekleyin.
    6. Numuneyi% 2 Triton X-100'de 4 ° CO / N'de saklayın.
  4. 4. Gün: Birincil antikor inkübasyonu
    1. Primer antikorun seyreltme solüsyonunu 0.2 mL Bovine Serum Albumin (BSA), 0.3 mL Triton X-100 ve 0.1 g sodyum azid'in 100 mL 0.01 M PBS (pH 7.4) içerisinde çözündürülmesi ile hazırlayın.
      Dikkat: Sodyum azid akut toksiktir. Solunması ve dokunulması engellenmelidir. Uygun PPE kullanın.
    2. Yukarıdaki seyreltme tamponunda primer antikoru (NFP) 1: 600 sulandırın (adım 3.4.1). Örnek hafifçe besleyici üzerinde sallanan tutarak, 3 ° C 3-6 gün boyunca NFP antikoru ile örneği inkübe edin. Daha büyük numuneler inkübasyon sürelerinin artmasını gerektirecektir.
  5. İkincil antikor inkubasyonu
    1. Bağlanmamış birincil antikoru çıkarmak için numuneyi oda sıcaklığında 1 saat boyunca PBS'de 4x yıkayın. 0.2 g BSA ve 0,3 mL Triton X-100'ün 100 mL 0.01 M PBS (pH 7.4) içinde eritilmesi ile sekonder antikor için seyreltme solüsyonunu hazırlayın.
    2. Seyreltme tamponu (adım 3.5.2) ikincil antikor (peroksidaz konjuge, afinite saflaştırılmış koyun anti-fare IgG-HRP) 1: 600 seyreltin. Numuneyi, ikincil antikor ile 4 ° C'de 3 gün inkübe edin ve numuneyi yavaşça nutrator üzerinde salıncak tutun.
  6. renklendirme
    1. Çözeltiyi karanlıkta tutarak, duman dolabının altında 0.002 g 3,3'-diaminobenzidin tetrahidroklorür (DAB), 0,05 mL mol / L Tris-HCI tamponuna (pH 7.6) ilave ederek DAB renklendirme çözeltisini hazırlayın.
    2. Numuneleri oda sıcaklığında PBS 4x'de 1 saat boyunca yıkayın.
    3. Yeni hazırlanmış DAB renklendirme çözeltisine 10 uL% 30 H202 ekleyin ve 4 ° CO / N'de solüsyon ile inkübe edin veya hafifçe nutrator'da sallanırken 3 d süreyle inkübe edin.
    4. Reaksiyonu pla tarafından durdurunOptimum boyama yoğunluğuna ulaşıldığında PBS içinde% 0.04 sodyum azid ile numuneyi cingleyin.
      NOT: Bu adıma kadar sodyum azid kullanmaktan kaçının, çünkü bu yaban mersini peroksidazını inhibe eder.
  7. Boyalı dokuyu görüntüleme
    1. PBS içeren bir petri cam tabakasına (5 cm yüksekliğinde, 10 cm çapında) dikkatli bir şekilde örnek aktarın. Bir stereomikroskopta monte edilmiş bir kamera kullanarak tümüyle monte edilmiş görüntüleri yakalayın.
      NOT: Şeffaf bir cam tabağa PBS içinde tamamen batırılmışken, tümüyle monte lekelenmiş dokular görüntülenecektir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Şekil 1 - 4 , S. murinus'un ekstrahepatik safra yolunda NFP-pozitif sinir lifleri için tipik sonuçları göstermektedir. NFP'ye karşı antikor, yüksek özgünlük ve asgari seviyede ekstrahepatik safra yolunun ( Şekil 1 ), safrakesesi ( Şekil 2 ), üst safra kanalının ( Şekil 3 ) ve duodenal papilla alanının ( Şekil 4 ) tüm görüntüsünde innervasyonu etiketli olarak etiketledi arka fon.

Numunenin tüm dokuları için şekil ve boyut ne olursa olsun, tegmental sinirler aynı anda boyanabilir. Ekstrahepatik safra yolunun innervasyonuna ek olarak, özofagus ve midenin vagusunun çalışma ve dağılım yoğunluğu açıkça sergilenmiştir ( Şekil 1 ).

Şekil 2 ).

Üst safra kanalında iki tür sinir demeti etiketli idi. İnce sinir demetleri düzensiz ve yoğun bir sinir ağı oluşturdu, yapıştırabildi ve safra yolunda varlığını sürdürdü; Daha kalın sinir demetleri safra yolunun yüzeyine paralel olarak dağıldı ( Şekil 3 ).

Ortak safra kanalı mavi neopren lateksi ve beyaz neopren lateksi olan damarlarla etiketlendi. Ortak safra kanalının ve duodenal papilla alanının sonundaki ince sinir lifleri, yüksek c ile açıkça gösterildi Ontrast ( Şekil 4 ).

Şekil 1
Şekil 1: Safra Yollarında, Özofagusta ve Midede NFP-pozitif Sinir Lifleri. Oklar, yemek borusu boyunca giden vagusun karnına gösteriyor. CBD, Ortak Şiddetli Kanal; Özofagus; St, karın. Ölçek çubuğu = 1,300 μm. Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.

şekil 2
Şekil 2: Safra Kesesinde NFP-Pozitif Sinir Lifleri. Safra kesesinin kan damarları beyaz lateks ile etiketlendi. Safra kesesinin boynunda bol miktarda innervasyon meydana geldi (oklar). Ölçek çubuğu = 1,000 μm.Ref = "http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55483/55483fig2large.jpg" target = "_ blank"> Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.

Şekil 3
Şekil 3: Üst Safra Kanalı'nda NFP-pozitif Sinir Lifleri. İki tip sinir demeti gözlemlendi. Bir tip yapışkan koştu ve ekstrahepatik safra yolunda / içinde bulunan ince sinir demetiydi (oklar); Diğer tür, ekstrahepatik safra yolunun yüzeyine paralel olarak dağılan ve safra kesesi ile duodenum arasında (üçgenler) koştuğu daha kalın sinir demetleriydi. PV, Portal Damar. Ölçek çubuğu = 650 μm. Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.

Şekil 4 Şekil 4: Duodenal Papilla Bölgesi'nde NFP-pozitif Sinir Lifleri. Ortak safra kanalı mavi lateks ve beyaz lateksli damarlar (*) ile etiketlendi. Oklar, ortak safra kanalının sonunun inervasyonunu gösterir ve üçgenler, ortak safra kanalından ve damarlardan gelen duodenal papilla alanının (P) inervasyonunu gösterir. Ölçek çubuğu = 1,000 μm. Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu çalışma, nörofilament proteine ​​karşı bir antikor kullanarak ekstrahepatik safra yolunun innervasyonunun görselleştirilmesi için deneysel prosedürü açıklamaktadır. Bu protokol, Kuratani ve Tanaka 1 , 2 , 3 tarafından tanımlanan protokolden uyarlanmıştır.

Bu deney için, tüm montaj boyama yaklaşımı 2-3 hafta sürdüğü için, deneylerin her biri için zaman çizelgesini planlayın. Dondurma / çözülme işlemi dışında, dokuyu içeren damar her zaman bir besleyici üzerinde döndürülmelidir. Özellikle birincil ve ikincil antikorlar ile inkübasyon sırasında örnek, reaksiyon solüsyonlarına numunenin üniform bir şekilde maruz kalmasını sağlamak için bir besleyici üzerinde dönerken soğuk bir muhafaza odasında tutuldu. Çeşitli çözeltiler -% 1 (ağ / hac) ortopereodik asit,% 0.004 (ağ / hac) papain ve birincil / ikincil antibiyotik için seyreltme tamponuÖlür - her deney için taze yapılmalıdır. Protokol boyunca, çözeltiler değiştirilirken numuneye dokunmaktan ve dokunmaktan kaçınmak için çözümler forseps 15 ile çıkartılmak yerine dökülmelidir.

PFA ile sabitlendikten sonra numuneler DW veya PBS ile yeterince yıkanmalıdır. Buna ek olarak, papain kuluçka ile enzimatik muamele önemlidir. Antijen alımı için kullanılan ısı ve enzim antikor penetrasyonu için dokuyu hazırlamaya yardımcı olur. Çözeltilerin penetrasyonunu arttırmak için dokunun dış zarının 30 dakika -20 ° C'de veya -80 ° CO / N 15 dondurma işlemi ile bozulması gerekir.

Solüsyonun tüm numuneyi inkübe edebilmesi için deneysel numuneyi yeterli miktarda tampon çözeltisi içine daldırmak önemlidir. Birincil antikorun inkübasyon süresi ampirik olarak belirlenmelidirD farklı dokular ve numune boyutları için. Genellikle, 2-3 cm'lik bir numune için 3 gün olmalıdır. Her bir antikor için optimal seyreltme ampirik olarak belirlenmelidir. Uygun antikor tamponu kullanıldığında hem primer hem de sekonder antikorlar için 1: 600'lük bir seyreltme önerilir.

Bu çalışma, ayrıntılı olarak, S. murinus'un safra yolunda nörofilament proteini ekspresyonunu ortaya çıkarmak için çok yönlü, tamamen montajlı bir immünohistokimyasal yaklaşımın protokolünü tanımlamaktadır. Bu yöntem, pek çok türün tüm organlardaki inervasyonu analiz etmek için kullanılabilir. Ayrıca, bu protokol, diğer nöronal antikorları test etmek için uyarlanabilir, ancak antikorların optimizasyonu yapılmalıdır.

Bununla birlikte, teknik sığ sinir dokusunun etiketlenmesinde ve innervasyonun üç boyutlu bir modelinin oluşturulmasında sınırlıydı. Ayrıca, sinir liflerinin özelliklerini ( yani sempatik veya parAsimptetik, motor veya duyu, vb. ).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan eder.

Acknowledgments

Yazarların onayları yok.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
orthoperiodic acid Wako 162-00732
papain Wako 164-00172
bovine serum albumin (BSA) Wako 010-15131
sodium azide Nacalai Tesque 312-33
neurofilament protein (NFP) antibody Dako M0762, lot 089, clone: 2F11
peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP MBL Code 330
3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) Wako 349-00903
imidazole Sigma I-0125

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kuratani, S., Tanaka, S., Ishikawa, Y., Zukeran, C. Early development of the hypoglossal nerve in the chick embryo as observed by the whole-mount nerve staining method. Am. J. Anat. 182 (2), 155-168 (1988).
  2. Kuratani, S., Tanaka, S. Peripheral development of the avian vagus nerve with special reference to the morphological innervation of heart and lung. Anat. Embryol. (Berl). 182 (5), 435-445 (1990).
  3. Kuratani, S., Tanaka, S. Peripheral development of avian trigeminal nerves. Am. J. Anat. 187 (1), 65-80 (1990).
  4. Yi, S. Q., et al. House musk shrew, Suncus murinus: a novel and natural obesity-resistant animal model. Obes. Metab. 6, 22-28 (2010).
  5. Yi, S. Q., et al. Surgical anatomy of innervation of the gallbladder in humans and Suncus murinus with special reference to morphological understanding of gallstone formation after gastrectomy. World J. Gastroenterol. 13 (14), 2066-2071 (2007).
  6. Yi, S. Q., et al. Anatomical study of the pancreas in the house musk shrew, Suncus murinus, with special reference to the blood supply and innervation. Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 273 (1), 630-635 (2003).
  7. Yi, S. Q., et al. Surgical anatomy of the innervation of the major duodenal papilla in humans and Suncus murinus, from the perspective of preserving innervation in organ-saving procedures. Pancreas. 30 (3), 211-217 (2005).
  8. Yi, S. Q., et al. Surgical anatomy of the innervation of the pylorus in humans and Suncus murinus, in relation to the surgical technique for pylorus-preserving pancreatoduodenectomy. World J. Gastroenterol. 12 (14), 2209-2216 (2006).
  9. Yi, S. Q., Ren, K., Kinoshita, M., Takano, N., Itoh, M., Ozaki, N. Innervation of Extrahepatic Biliary Tract, With Special Reference to the Direct Bidirectional Neural Connections of the Gall Bladder, Sphincter of Oddi and Duodenum in Suncus murinus, in Whole-Mount Immunohistochemical Study. Anat. Histol. Embryol. 45 (3), 184-188 (2016).
  10. Wang, H., et al. Neurofilament proteins in axonal regeneration and neurodegenerative diseases. Neural Regen. Res. 7 (8), 620-626 (2012).
  11. Wyatt, A. P. The relationship of the sphincter of Oddi to the stomach, duodenum and gall-bladder. J. Physiol. 193 (2), 225-243 (1967).
  12. Mawe, G. M., Kennedy, A. L. Duodenal neurons provide nicotinic fast synaptic input to sphincter of Oddi neurons in guinea pig. Am. J. Physiol. 277, G226-G234 (1999).
  13. Seo, J. H., Cho, S. S., Lee, I. S., Lee, H. S. Anatomical and neuropeptidergic properties of the duodenal neurons projecting to the gallbladder in the golden hamster. Arch. Histol. Cytol. 65 (4), 317-321 (2002).
  14. Padbury, R. T., Furness, J. B., Baker, R. A., Toouli, J., Messenger, J. P. Projections of nerve cells from the duodenum to the sphincter of Oddi and gallbladder of the Australian possum. Gastroenterology. 104 (1), 130-136 (1993).
  15. White, J. J., Reeber, S. L., Hawkes, R., Sillitoe, R. V. Wholemount immunohistochemistry for revealing complex brain topography. J. Vis. Exp. (62), e4042 (2012).

Tags

Fizyoloji Sayı 124 Ekstrahepatik safra yolu otonom sinir innervasyon bütün montaj immünohistokimyası nörofilament proteini,
Safra Yolunun İnternalasyonunu İncelemek İçin Bir Tam Montajlı İmmünohistokimyasal Yöntem Kullanmak<em&gt; Suncus murinus</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ren, K., Dai, Y., Yi, K., Kinoshita, … More

Ren, K., Dai, Y., Yi, K., Kinoshita, M., Itoh, M., Sakata, I., Sakai, T., Yi, S. Q. Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus. J. Vis. Exp. (124), e55483, doi:10.3791/55483 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter