Summary
Här beskriver vi ett protokoll som tillåter histologiska och molekylär analys av huden prover efter Candida albicans intradermal injektion. Detta protokoll upprätthåller den strukturella integriteten av huden och möjliggör lokalisering av vävnad boförälder eller nyanställd immunceller som patogen distribution.
Abstract
Huden är ett oerhört utökade organ i kroppen och på grund av denna stora yta, det utsätts kontinuerligt för mikroorganismer. Hudskador kan lätt leda till infektioner i dermis vilket i sin tur kan resultera i spridning av patogener i blodomloppet. Förstå hur immunförsvaret bekämpar infektioner i mycket tidigt skede och hur värden kan eliminera patogener är ett viktigt steg för att ange en bas för framtida terapeutiska interventioner. Här beskriver vi en modell av Candida albicans infektion som kan visualisera processer som inträffar tidigt under en infektion, inklusive när patogen har passerat den epiteliala barriären, liksom det immunsvar som framkallas av C. albicans invasionen. Vi använde denna infektion modell för att utföra histologiska analyser som visar de immunceller som infiltrerar huden samt närvaro och lokalisering av patogener. Prover som samlats in efter infektionen kan bearbetas för RNA-extraktion.
Introduction
Den mänskliga kroppen är täckt med ett extremt högt antal mikroorganismer. Hudytan är en livsmiljö av nästan en miljon bakterier per kvadratcentimeter1. Detta nummer, dock återspeglar inte den full mängd mikroorganismer som colonizes huden. Förutom bakterier, är människokroppen koloniserade av många svamp arter, inklusive C. albicans, som är kompetent att överleva både i slemhinnor och hud nivå2.
Andelen personer som diagnostiserats med svampinfektioner ökat enormt under de senaste åren. Detta beror främst på det högre antalet immunsupprimerade personer, dvs., HIV-positiva patienter och patienter som har genomgått antingen kemoterapi eller Immunosuppressiva läkemedel efter transplantation3. I en övervakning studie utförd i USA, visade Wisplinghoff et al. att 9,5% av nosokomiala blodomloppet infektioner orsakas av Candida arter4. På grund av ökad förekomst av svampinfektioner, och särskilt på grund av förhöjda andelen Candida arter hittade under infektioner blodomloppet, är förstå hur denna patogen flyr kontroll av immunsystemet extremt viktigt.
C. albicans är en dimorfa svamp som växer i olika morfologiska former såsom jäst, blastospores, pseudohyphae och hyfer beroende på miljöförhållanden5. I sin hyphal form, C. albicans visar sin högsta invasivitet kapacitet och har förmågan att penetrera epitel6.
C. albicans infektioner har studerats med hjälp av flera experimentella metoder. Den vanligaste modellen av infektion är intravenös injektion av C. albicans jäst7. Men tar denna modell inte hänsyn till alla processer som hända innan svampen lyckas sprida sig in i blodomloppet. En annan modell tar fördel av C. albicans förmåga att invadera epitel. Denna metod, även känd som den sand papper modell8, utvecklades av Gaspari et al. 19989och består av att använda sand papper för att slipa huden, vilket eliminerar den hornlagret innan du applicerar C. albicans. Detta förfarande möjliggör svampen penetrera epitel, vilket möjliggör analys av denna patogen invasiv förmåga. Slutligen, andra modeller av infektioner för gastrointestinala10 och luftvägar11 har använts i olika studier.
Bildandet av ett sår (som sand pappersmodell) orsakar aktivering av flera vägar, inklusive immunceller rekrytering och aktivering, för att främja den läkande process12. Detta kan antingen ändra eller maskera immunsvar specifikt framkallade mot patogener, vilket leder till confounding resultat.
Här beskriver vi en metod för hudinfektion som undviker inledande såret bildandet och induktion av en basal inflammatoriska miljö. För att bibehålla intakt epitelial struktur, injicera vi direkt C. albicans i sin hyphal form i den djupa derma. Även om en enda injektion kan framkalla mild inflammation, mängden inflammation är begränsad och inskränkt jämfört med bildandet av ett öppet sår som sand pappersmodell. Den metod som vi beskriver här tillåter studier av immunsvaret mot svampinfektion och spridning samtidigt undvika överdriven och redan existerande inflammatoriska miljön som orsakas av mekaniska skador.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla förfaranden som godkändes inom ramen för institutionella djur vård och användning kommittén (IACUC) och drivs under övervakning av Institutionen för djur resurser på barn 's Hospital (ARCH) vid Boston Children's Hospital eller godkändes av italienska Hälsovårdsministeriet och utförs under den institutionella djur eftervård kommittén på det Universitetar av Milano-Bicocca.
1. C. albicans förberedelse
- Kultur C. albicans, stam CAF3-113, i rör som innehåller rika medium (jäst extrakt pepton dextros (YEPD), 1% (w/v) jästextrakt, 2% (w/v) av Bacto pepton, 2% (w/v) glukos) kompletteras med uridin (50 mg/L) vid 25 ° C. Under dessa förhållanden växer C. albicans som en jäst.
Obs: Andra C. albicans stammar kan användas, såsom den kliniska isolera C. albicans stam SC531413. Eftersom vi har nyligen visat att ulcerös processen framkallas av aktiveringen av det medfödda immunsystemet14, teoretiskt varje C. albicans stam som underhåller både dess cellvägg komponenter och struktur, samt förmåga att originera hyphal projektioner, kunde användas. - Övervaka kulturen genom att räkna den cellulära koncentrationen använder en cell counter analyzer.
- Skörda kulturen när den når en koncentration på ca 8 x 106 celler/mL. Alternativt använda en spektrofotometer för att mäta OD600.
Obs: Vanligt, ett värde av OD600 = 1 motsvarar en jäst koncentration på 3 x 107 celler/mL, men titrering rekommenderas. - Återsuspendera kulturen i YEPD-uridin medium, med HEPES (50 mM, pH 7.5) som en buffert agent och inkubera kulturen vid 37 ° C att framkalla hyfer bildas. Kontrollera hyphal bildandet i Mikroskop vid 100 gångers förstoring. Hyphal bildandet är synliga 5 h efter odling vid 37 ° C; dock använda cellerna 16 h efter inkubation vid 37 ° C när procentandelen hyphal når nästan 95% av den totala kulturen.
- För att ytterligare berika preparatet i hyphal koncentration, centrifug alikvoter av kulturen på 3300 x g för 5 min. avlägsna supernatanten och återsuspendera pelleten i steril fosfatbuffrad Koksaltlösning vid en koncentration på 1 x 108 hyfer/mL.
2. djup Dermal injektion
- 24 h före förfarandet infektion, söva möss med en intraperitoneal injektion av ketamin (80-100 mg/kg) och xylazin (10 mg/kg), och sedan raka flanken av möss med en elektrisk clipper.
Obs: Efter alla ingrepp som omfattar narkos, placera möss under en värme lampa tills de återhämtat effektivt. - Vila på möss för 24 h för att undvika någon inflammation på grund av rakning processen.
- 24 h efter rakning ingreppet, söva möss med en intraperitoneal injektion av ketamin (80-100 mg/kg) och xylazin (10 mg/kg).
- Kontrollera tass reflex för att säkerställa att möss är djupt sövda. Bedöma tass reflex genom att nypa fast tass. Om anestesi uppnås, djuret känner inte smärta och rör sig inte.
- Injicera C. albicans hyfer i den djupa derma med en 0,3 mL insulinspruta med en 30 G x 8 mm kanyl i en slutlig volym av 50 µL/insprutning, motsvarar 5 x 106 hyfer/injektion.
- Dra huden på den raka flanken spänd med två fingrar för att injicera volymen direkt i den djupa derma. Stick in nålen med en vinkel på 10-15° med den fasade kanten av nålen uppåt.
- Med denna vinkel, kommer patogen att injiceras med ett djup av cirka 300-500 µm. För att säkerställa injektionen utförs väl, absorberas Kontrollera att den injicerade volymen bildar en bula som några minuter efter injektionen.
Obs: Knölen bildade efter injektionen kommer att vara cirka 1 cm2. Detta är det område som kommer att tas bort vid den angivna tidpunkten för antingen molekylär eller histologisk analys. - För tidpunkter på mindre än 24 h (rekommenderas) Markera området av infektion med en tuschpenna, eftersom knölen bildade med injektionen kvarstår i några minuter, varefter det absorberas. För tidpunkter av 24 h eller mer krävs det här steget inte, eftersom antingen ett sår eller en cysta kommer synas tydligt.
3. prova insamling och preparering för histologiska färgning
- Euthanize möss enligt institutionella förfaranden.
- Med hjälp av kirurgisk pincett, dra huden på gränsa av den injicerade webbplats, tidigare har markerats med en tuschpenna. Med kirurgisk sax, punktskatt på infekterade webbplats genom att skära huden efter den markerade linjen.
Obs: Var noga med att separera huden från bukhinnan med rund spets sax. - Sänk ner huden i en disponibel bas mögel fylld med optimal skärtemperatur (ULT) förening, med den inre sidan av huden uppåt. Frysa provet i flytande kväve tills föreningen blir vit. Inte låt det flytande kvävgasen Täck över provet innan det är helt frusen eftersom det skulle skada provet.
Obs: varning! Under steg 3.3, bära ansiktsskydd för skydd från flytande kväve. - Om proverna inte används omedelbart för bild förberedelse, snabbt lagra dem vid-80 ° C.
Obs: Prover kan lagras vid-80 ° C på obestämd tid.
4. beredning av diabilder
- Halvera provet att förbereda skivor för histologi start från centrera av provet.
- Skär 5 µm tjocka skivor med en kryostaten.
Obs: För huden prover, temperatur kryostaten bör inte vara högre än-25 ° C. En högre temperatur skulle orsaka en partiell smältning av H-ULT och proverna skulle därför inte upprätthållas i rätt position under förfarandet för styckning. - Använda positivt laddade objektglas för att samla skivor.
- Om de insamlade skivorna inte används snart efter beredning, lagra dem på-20 ° C. Vid denna punkt, kan skivor lagras vid-20 ° C på obestämd tid.
5. hematoxylin och Eosin färgning
- Fläcken bilderna genom nedsänkning i Gills hematoxylin för 4 min. Tvätta objektglasen i rinnande vatten i 5 min.
- Fläcken bilderna genom nedsänkning i Eosin Y lösning för 1 min. Tvätta objektglasen i rinnande vatten i 5 min. skölj glasen med destillerat vatten innan du fortsätter protokollet.
- Torka genom nedsänkning i seriellt ökande koncentrationer av etanol lösningar (50%, 70%, 80%, 95%, 100%). Sänk ner bilderna för 15 s i varje etanol lösning.
- Klara bilder i minst 2 min genom nedsänkning i en histologisk clearing agent.
- Montera bilder använder monteringsmedium och täckglas.
- Skaffa bilder bilder med en Mikroskop diascanner vid 40 X förstoring.
6. Perjodsyra-Schiff (inte) färgning
- Fixa bilderna med ≥99.5% aceton i rumstemperatur i 1 min. Tvätta objektglasen i rinnande vatten i 1 min.
- Fläcken bilderna genom nedsänkning i periodisk syra lösningen (1 g/dL) för 5 min. Tvätta objektglasen i 3 ändringar av destillerat vatten.
- Fläcken bilderna genom nedsänkning i Schiff's reagens för 15 min. Tvätta objektglasen i rinnande vatten i 5 min.
- Fläcken bilderna genom nedsänkning i Gills hematoxylin för 5 min. Tvätta objektglasen i rinnande vatten i 30 s.
- Torka glasen genom nedsänkning i 3 ändringar av 100% etanol. Sänk ner bilderna för 15 s varje gång.
- Klara bilder i minst 2 min genom nedsänkning i en histologisk clearing agent.
- Montera bilder använder monteringsmedium och täckglas.
- Skaffa bilder bilder med en Mikroskop diascanner.
7. prova samling och förberedelse för RNA-extraktion
- Euthanize möss enligt institutionella förfaranden. Ta bort huden proverna som i steg 3,2.
- Sänk ner proverna i en 2 mL snapin-cap rör med 1 mL reagens för syra guanidinium kaliumtiocyanat-fenol-kloroform extraktion.
Obs: Protokollet kan pausas här och proverna kan lagras vid-80 ° C. - Skär provet i bitar av ungefärligt 0.2 cm2 med kirurgisk pincett.
Obs: varning! De flesta av reagenser för RNA isolering är giftiga och mutagena. Steg 7.3 och 7.4 måste göras i dragskåp. - Krossa provet med en pärla kvarn med en hastighet av 20 svängningar/s för 20 min. Alternativt, en mekanisk potter kan användas.
- Kontrollera den effektiva homogenisering av prov genom att titta för förekomst av intakt bitar av hud. Upprepa detta steg om proverna inte är helt homogeniseras.
- Centrifugera proverna vid 16 000 x g i 1 min. Håll supernatanterna för RNA-extraktion och kassera pelleten. Detta steg utförs för att eliminera hår och skräp som kan blockera kolumnerna extraktion.
- Fortsätt med RNA-extraktion med RNA rening kolumner14.
- Använda en spektrofotometer för att bedöma RNA rening och koncentration. Om RNA extrakt inte används omedelbart för cDNA förberedelse, lagra proverna vid-80 ° C.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Genom injektion av patogenet direkt i den djupa derma förblir strukturella morfologi av vävnad intakt (figur 1A).
Underhåll av huden strukturell integritet kan påvisande av immunceller och deras localization på platsen för infektion. Den högre förstoring som visas i figur 1B avslöjar att bölden består huvudsakligen av polymorfonukleära leukocyter (PMCs) som innehåller spridningen av den sjukdomsalstrande organismen av dess inneslutning till platsen för infektion. Rekrytering av PMCs, såsom neutrofiler, tillåter bildandet av abscess, därmed undvika spridning av svampen inom den vävnad14. Större förstoring (figur 1 c, D) visar hur de omgivande områdena abscess är också berikad med PMCs.
Genom att bevara den strukturella integriteten, kan lokalisering av patogener under infektionen bestämmas. Dra nytta av det förhöjda innehållet av polysackarider i cellväggen av C. albicans, identifiering av patogenen utfördes med hjälp av PAS-färgning, som ger en lila-magenta färg till svampen. Som visas i figur 2A, visar PAS-färgning tydligt att patogenen är begränsat inuti abscess, bildade genom rekrytering av granulocyter14. C. albicans syns tydligt på den högre förstoringen (figur 2B), och det verkar vara omgiven av nekrotisk och immuna celler.
Använder metoden som beskrivs ovan, kan infektionsprocessen och åtföljande inflammation följas över tid. På cellen mycket början, immun leder rekrytering till bildandet av en abscess (figur 1A och figur 3A). När analysen av hudvävnaden förlängd upp till 48-72 h, störningar av strukturerna som huden och bildandet av ett ärr var visualiserat (figur 3B, C). Bildandet av denna struktur är på grund av läkningsfasen som följer utvisningen av den patogen14.
Den process som leder till bildandet av magsår kan följas i flera dagar efter infektionen. Som visas i figur 4A, visar C57BL/6 vildtyp möss en ulcerös processen som ökar över tid. Runt visar 70-80% av mössen bildandet av magsår 72 h efter infektion. På grund av experimentell variationer, kan minst 8 möss användas i varje experiment. För statistisk analys rekommenderas det att använda minst 8-10 möss för varje sår poäng om man jämför olika genotyper eller behandlingar. I detta fall ska även små skillnader synas. Illustrativa bilder av ulcerös processen visas i figur 4B. Vid specifika behandlingar eller genetiska brister, bildandet av sår kan reduceras eller upphävas14. I vissa fall bildas i stället för såret, en cysta, som illustreras i figur 4 c.
Andra än Hematoxylin och Eosin och PAS färgning, bilderna kan färgas för antingen specifika cellulära markörer eller med andra immunhistokemiska färgningar bättre visualisera: kollagenfibrer; cytokin/chemokiner läge inom vävnaden; och immunceller identitet och rumsliga fördelning.
Förutom histologiska preparatet, kan prover användas också för molekylära analyser. Hela injektionsstället kan censurerade, när det gäller histologiska preparat, och bearbetas för RNA-extraktion. RNA-extraktion från vävnaden tillåter att studera och identifiera de gener uppreglerad under infektion med patogenen. Möjligheten att bearbeta proverna för molekylära analyser är ett viktigt verktyg, tillsammans med histologisk analys, för att bättre karaktärisera typ av immunsvar framkallade mot patogen och dess förordning under de tidiga och sena stadierna efter den utmaning14.
Figur 1: underhåll av huden morfologi och cellulär lokalisering. (A) alla lager bevaras. Epitel, adipocyter och muskelceller är lätt igenkännliga. (B) polymorfonukleära leukocyter (markerade med pilar) kan identifieras inom abscess. (C, D) Större förstoring visar förekomsten av polymorfonukleära leukocyter (pilar) i området kring abscess. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: Identifiering av C. albicans. (A) C. albicans kan upptäckas inom vävnaden med PAS färgning. (B) högre förstoring till bättre visualisera svampen, målat i lila, trånga inuti abscess. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: uppföljning av den inflammatoriska processen. (A) i början av den inflammatoriska processen som framkallas av C. albicans injektion, granulocyter rekryteras för att bilda en böld för att begränsa patogenen. (B, C) Bildandet av magsår är nödvändigt för utvisning av svampen. Den läkande vävnaden kännetecknas av en förändring i den strukturella integriteten av huden och kan leda till bildandet av ett ärr. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: kinetik av ulceration. (A), ulcerös processen följer en trend av ökad under de första dagarna efter infektionen. 72 h efter infektionen, 70-80% av mössen visar ett sår på platsen för infektionen. 16 C57BL/6 vildtyp djur användes. (B) belysande bilder av sår som utvecklat 48 h efter infektion. (C) belysande bilder av cystbildning efter infektion. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Här har vi beskrivit en metod av C. albicans infektion att studera den inflammatoriska processen som är initierade vid svamp ingången i den djupa derma.
Även om hud abscess formation är en relativt sällsynt händelse på C. albicans infektion15, tillåter injektion av svampen direkt i den djupa derma inte bara studier av svamp-driven abscess formation, men även analys av specifik immun celler som deltar innehåller svamp sprida. Med den metod som beskrivs här, är det möjligt att studera samspelet mellan immunceller, liksom rekrytering av de immunceller som är viktiga att kontrollera svamp spridningen, samtidigt som man undviker eventuella inflammatoriska svar på mekaniska skador eller sår bildning. Möjlighet att hålla epitelial struktur intakt faktiskt viktigt att undvika utveckling av en inflammatoriska miljön som orsakas av en mekanisk stimulus, såsom ett skrapsår. Som theorized för första gången av Polly Matzinger i 199416, kan skada signaler, faktiskt, aktivera ett immunsvar och följaktligen kraftigt påverka immunsvaret framkallas av patogenen.
Skador associerade molekylära mönster (dämpar) kan härröra från döda celler, men de kan också frigöras under stress förhållanden. Eftersom dessa signaler kan produceras i situationer av vävnadsskada, skulle bildandet av ett sår orsaka en hyper-inflammatoriska miljön redan innan ramen av en infektion. Den metod som vi har beskrivit begränsar frisläppandet av dämpar och därmed minskar förekomsten av störande element.
Injektion av en patogen direkt i den djupa derma är dessutom en metod som kan användas inte bara för svampinfektioner, men också för bakteriell utmaningar. En annan patogen som ett förhöjt antal fall av både kutan och blodinfektioner är Staphylococcus aureus4. Vi har nyligen visat hur detta protokoll är också ett viktigt verktyg att studera S. aureus infektion14. S. aureus är i synnerhet känd i klinik för sin förmåga att bilda abscesser i flera områden av kroppen17. Injektion av S. aureus i den djupa derma leder till bildandet av abscesser, vilket möjliggör samtidigt studiet av de mycket tidiga händelser som drivs av S. aureus möter samt inblandning av immunsvaret som leder till läkning fas.
Slutligen, en annan viktig funktion av den metod som beskrivs här är att upprätthållandet av en intakt epitelial struktur ger möjlighet att analysera histologiskt localizationen av immunceller och aktivering av skilda vägar som kan vara rumsligt uppdelade. Under dessa försöksbetingelser, i själva verket olika anatomiska strukturer i huden ändras inte och både immunceller och inflammatoriska mediatorer kan visualiseras i en exakt plats.
Användningen av denna metod som bevarar den rumsliga fördelningen av immunceller är därför idealisk att bättre förstå rollerna av varje cellulära typ under svamp och bakteriella hudinfektioner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
FG stöds av Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (IG 2016Id.18842), Cariplo Foundation (Grant 2014-0655) och Fondazione Regionale per la Ricerca Biomedica (FRRB).
IZ stöds av NIH grant 1R01AI121066-01A1, 1R01DK115217, HDDC P30 DK034854 grant, Harvard Medical School Milton hittade, CCFA Senior forskning Awards (412708), den Eleanor och Miles Shore 50-årsjubileum Fellowship Program, och den Cariplo Foundation ( 2014-0859).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| PBS | Euroclone | ECB4053L | warm in 37 °C bath before use |
| H-OCT compound | histo-line laboratories | R0030 | |
| Gill's Hematoxilyn | histo-line laboratories | 09-178-2 | |
| Eosin Y solution, alcoholic | histo-line laboratories | 09-209-05 | |
| Ethanol absolute | scharlau | ET00232500 | |
| Citro-HISTOCLEAR | histo-line laboratories | R0050 | |
| Eukitt, mounting medium | bio-optica | ||
| Acetone | sigma-aldrich | 179124 | |
| PAS staining system | sigma-aldrich | 395B-1KT | |
| Bacto Peptone | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | BD | 212750 | |
| D(+)-Glucose anhydrous for molecular biology | Applichem PanReac | 50-99-7 | |
| Uridine | Merck Millipore | 8451 | |
| HEPES | Applichem PanReac | A1070,0500 | |
| Safe-Lock tubes 2 mL | eppendorf | 30121597 | |
| TRIzol Reagent | Life Technologies | 15596018 | Toxic, corrosive and mutagen. Use all precaution needed |
| Rneasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 | |
| liquid nitrogen | Wear eye protection | ||
| Instrument | |||
| Coulter Counter-Particle Count | Beckman Coulter | ||
| Centrifuge 5415 R | eppendorf | ||
| MC 3000 Microtome Cryostat | histo-line laboratories | ||
| TissueLiser | QIAGEN | ||
| Materials | |||
| 0.3 ml Insulin Syringe with a 30G x 8mm needle | BD | 324826 | |
| Surgical forceps | |||
| Surgical scissors | |||
| Base mould disposable | histo-line laboratories | 2781 | |
| Positively charged bio microscope slides | bio-optica | 09-2000 | |
| Cover slips 24 x 50 mm | thermo scientific | 11911998 |
References
- Belkaid, Y., Segre, J. A. Dialogue between skin microbiota and immunity. Science. 346 (6212), 954-959 (2014).
- Kashem, S. W., Kaplan, D. H. Skin Immunity to Candida albicans. Trends Immunol. 37 (7), 440-450 (2016).
- Havlickova, B., Czaika, V. A., Friedrich, M.
- Wisplinghoff, H., Bischoff, T., Tallent, S. M., Seifert, H., Wenzel, R. P., Edmond, M. B. Nosocomial Bloodstream Infections in US Hospitals: Analysis of 24,179 Cases from a Prospective Nationwide Surveillance Study. Clin Infect Dis. 39 (3), 309-317 (2004).
- Romani, L. Immunity to fungal infections. Nat Rev Immunol. 4 (1), 11-24 (2004).
- Odds, F. C.
- MacCallum, D. M., Odds, F. C. Temporal events in the intravenous challenge model for experimental Candida albicans infections in female mice. Mycoses. 48 (3), 151-161 (2005).
- Dai, T., Kharkwal, G. B., Tanaka, M., Huang, Y. -Y., Bil de Arce, V. J., Hamblin, M. R. Animal models of external traumatic wound infections. Virulence. 2 (4), 296-315 (2018).
- Gaspari, A. A., Burns, R., Nasir, A., Ramirez, D., Barth, R. K., Haidaris, C. G. CD86 (B7-2), but not CD80 (B7-1), expression in the epidermis of transgenic mice enhances the immunogenicity of primary cutaneous Candida albicans infections. Infect Immun. 66 (9), 4440-4449 (1998).
- Koh, A. Y. Murine models of Candida gastrointestinal colonization and dissemination. Eukaryot Cell. 12 (11), 1416-1422 (2013).
- Mear, J. B., et al. Candida albicans Airway Exposure Primes the Lung Innate Immune Response against Pseudomonas aeruginosa Infection through Innate Lymphoid Cell Recruitment and Interleukin-22-Associated Mucosal Response. Infect Immun. 82 (1), 306-315 (2014).
- Leoni, G., Neumann, P. -A., Sumagin, R., Denning, T. L., Nusrat, A. Wound repair: role of immune-epithelial interactions. Mucosal Immunol. 8 (5), 959-968 (2015).
- Fonzi, W. A., Irwin, M. Y. Isogenic strain construction and gene mapping in Candida albicans. Genetics. 134 (3), 717-728 (1993).
- Santus, W., et al. Skin infections are eliminated by cooperation of the fibrinolytic and innate immune systems. Sci Immunol. 2 (15), (2017).
- Florescu, D. F., Brostrom, S. E., Dumitru, I., Kalil, A. C. Candida albicans Skin Abscess in a Heart Transplant Recipient. Infect Dis Clin Pract. 18 (4), 243-246 (2010).
- Pradeu, T., Cooper, E. L. The danger theory: 20 years later. Front Immunol. 3, 287 (2012).
- Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation. Trends Microbiol. 19 (5), 225-232 (2011).
