Summary
Представлены подробные сведения о лабораторных процедурах безмедикаментозной активации in vitro (IVA) фолликулов яичников у пациенток с тяжелой дисфункцией яичников. Этот метод может увеличить количество извлекаемых ооцитов на гиперстимуляцию яичников и принести пользу сохранению фертильности для этих пациентов.
Abstract
Функция яичников постепенно снижается во время старения и в некоторых патофизиологических условиях, включая аномалии кариотипа, аутоиммунные заболевания, химио- и лучевую терапию, а также операции на яичниках. У незамужних женщин с тяжелой дисфункцией яичников сохранение фертильности важно для будущих беременностей. Хотя криоконсервация ооцитов является признанным методом сохранения фертильности, эти пациенты могут сохранять только ограниченное количество ооцитов даже после гиперстимуляции яичников, что приводит к повторным стимуляциям для обеспечения достаточного количества ооцитов, чтобы гарантировать будущую беременность. Чтобы решить эту проблему, мы недавно разработали процедуру безлекарстванной активации in vitro (IVA), которая позволяет нам стимулировать ранние стадии фолликулов яичников развиваться до стадии преантрального фолликула. Эти преантральные фолликулы могут реагировать на уникальный протокол стимуляции гонадотропином, что приводит к увеличению количества извлеченных ооцитов на стимуляцию яичников для криоконсервации. Безмедикаментозная ИВА состоит из хирургического подхода и стимуляции яичников. Мы удалили часть коры из одного или обоих яичников у пациенток с помощью лапароскопической хирургии. Кортикальные ткани яичников были разрезаны на небольшие кубики, чтобы нарушить сигнальный путь гиппопотама и стимулировать развитие фолликулов на ранней стадии. Эти кубики были привиты ортотропически в оставшиеся яичники, а также под серозу обеих фаллопиевых труб. Мы уже публиковали хирургическую процедуру безмедикаментозной ИВА и протокол последующей стимуляции яичников, но здесь мы представляем подробности лабораторных методов, необходимых для безмедикаментозной ИВА.
Introduction
Функция яичников постепенно снижается во время старения и некоторых патофизиологических состояний, включая аномалии кариотипа, аутоиммунные заболевания, химио- и лучевую терапию и операции на яичниках. Сохранение фертильности является одним из лучших вариантов для незамужних женщин с тяжелой дисфункцией яичников, чтобы сохранить их потенциал для будущей беременности. Для сохранения плодовитости в настоящее время доступны два метода, в основном в области онко-фертильности. Криоконсервация ооцитов является хорошо отлаженной процедурой сохранения фертильности, и было зарегистрировано много успешных случаев1,2. С другой стороны, криоконсервация ткани яичников также была установлена для сохранения фертильности у больных раком, но это все еще экспериментальная стратегия3,4. В обоих методах для наступления беременности необходимо множественное количество зрелых ооцитов. Как правило, пациентки с преждевременной недостаточностью яичников (POI), у которых аменорея в возрасте до 40 лет, и женщины среднего возраста с низким оварианным резервом показали плохую реакцию яичников (POR) на стимуляцию яичников для получения зрелых ооцитов5,6,7. Кроме того, у молодых пациенток с низким количеством антральных фолликулов также показал POR стимуляции яичников7. Эти пациентки имеют очень ограниченное количество извлекаемых ооцитов даже после правильной гиперстимуляции яичников, что требует нескольких дорогостоящих процедур для обеспечения достаточного количества ооцитов для беременности.
Донорство ооцитов с последующим экстракорпоральное оплодотворением (ЭКО) спермой мужа и переносом эмбрионов (ET) является единственным вариантом для этих пациентов POI и POR, которые испытывают трудности с получением собственных ооцитов8,9,10. Однако донорство ооцитов осложняется этическими проблемами, а также аутоиммунными осложнениями и осложнениями беременности11, 12,13,14. Для решения этих вопросов желательно налаживание лечения бесплодия с использованием собственных ооцитов пациентов. Для пациентов с POI мы разработали подход in vitro activation (IVA), чтобы обеспечить успешный рост фолликулов и генерацию зрелых ооцитов, что привело к ряду беременностей и родов15. В IVA мы фрагментировали кору яичников после удаления яичников под лапароскопической хирургией и культивировали их в течение двух дней, чтобы активировать фолликулы акт-стимулирующими препаратами, а затем выполнили гетеротопическую пересадку обратно в искусственные мешочки, сделанные под серозой фаллопиевых труб при второй лапароскопической операции15. Эта процедура способствовала росту первичных, первичных и вторичных фолликулов после фрагментации коры яичников, чтобы способствовать нарушению передачи сигналов гиппопотамов16,с последующей двухдневной культурой с сигнальными стимуляторами Akt17.
В отличие от тяжелых случаев POI, пациентки POR со сниженным овариалистным резервом имеют множественные вторичные фолликулы. Поскольку нарушение передачи сигналов гиппо гиппоспособникам само по себе эффективно способствует росту вторичного фолликула16,мы недавно продемонстрировали успешную беременность и родов для пациентов с ПОР, используя процедуру IVA без лекарств, включающую кортикальное фрагментирование и ортотопическую трансплантацию без лечения стимулирующими препаратами Akt. Безлекарстванная ИВА стимулирует раннюю стадию фолликулов яичников к развитию до стадии преантрального фолликула уже после одной операции и увеличивает количество извлеченных ооцитов для ЭКО-переноса эмбрионовна 15,18. Безмедикаментозный подход IVA имеет несколько преимуществ по сравнению с нашим оригинальным IVA: 1) избегая потенциальной потери фолликулов во время посева, 2) сводя к минимуму инвазивность и затраты на вторую операцию, 3) включая только краткосрочный послеоперационный постельный режим и 4) потенциал спонтанной беременности из-за ортотопической пересадки. Недавно мы опубликовали видео-статью, показывающую хирургические процедуры безмедикаментозного IVA19 и подробные протоколы стимуляции яичников после операции20. Здесь мы представляем подробную информацию о лабораторных методах, необходимых для безнаркотатической ИВА.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Письменное информированное согласие было получено от каждой пациентки POR с уменьшающимся оварианным резервом, которая была включена в лечение IVA без лекарств. Это исследование было одобрено этическим комитетом Международного университета здравоохранения и социального обеспечения (No 17-S-21). Клиническое исследование было зарегистрировано под номером UMIN000034464 и проводилось в соответствии с Кодексом этики Всемирной медицинской ассоциации (Хельсинкская декларация).
1. Извлечение коры яичников
- Удалить часть коры яичников (10 х 10 мм, толщина 2-3 мм) из одного или обоих яичников под общим наркозом посредством лапароскопической операции, как описаноранее 19,20.
- Поместите собранные коры яичников в стерильный контейнер, содержащий 10 мл модифицированного HTF (mHTF) при 37 °C.
2. Фрагментация коры яичников
ПРИМЕЧАНИЕ: Перед рассечением коры яичников разогрейте mHTF до 37 °C. Поддерживайте стерильные условия на протяжении всей процедуры. Все инструменты для этой процедуры перечислены в Таблице материалов.
- Поместите собранные коры яичников в пластиковую посуду, содержащую 5-10 мл mHTF при 37 °C и поместите их на тепловую пластину для поддержания ткани при 37 °C(рисунок 2A).
- Сделайте снимок каждой коры головного мозга с помощью цифровой камеры с именем пациента перед началом следующей процедуры, чтобы связать фоновые данные пациента.
- Поместите индивидуальную кору головного мозга на стерильную марлю, смоченную mHTF(рисунок 2B).
ПРИМЕЧАНИЕ: Нанесите дополнительный mHTF с одноразовой пипеткой на марлю, чтобы предотвратить высыханию поверхности коры во время этой процедуры. - Удаляют остаточную ткань продолговатого мозга там, где она выглядит розовой, с помощью микро-ножниц, чтобы толщина ткани достигала 1-2 мм(рис. 2С и D).
ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы избежать потери фолликулов на ранней стадии, не подготавливайте кортикальные полоски толщиной менее 1 мм, поскольку фолликулы ранней стадии расположены в пределах 1-2 мм от поверхности коры яичников21. - Рассейте кусок ткани размером 1 мм х 1 мм х 5 мм от каждой кортикальной полоски яичника с помощью тонкого скальпеля и подвергте его гистологическому анализу для определения наличия остаточных фолликулов, как описаноранее 18 (рисунок 2E).
ПРИМЕЧАНИЕ: Рассеченные ткани для гистологии погружают в mHTF и держат при 4 °C до фиксации(рисунок 2F,см. Шаг 4). - Разрежьте кору на полоски 1 мм x 1 мм x 10 мм с помощью тонкого скальпеля(рисунок 2G).
ПРИМЕЧАНИЕ: Его легче разрезать, надавливая на скальпель, чем натягивая на него. - Разрежьте эти полоски ткани на мелкие кубики размером 1 мм x 1 мм(рисунок 2H).
ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы избежать изменения осмотического давления в среде, добавляйте mHTF в умеренных количествах перед аутотрансплантацией тканей.
3. Аутоплантатирование корковых фрагментов яичников
- Откройте упаковку канюли IVA и наденьте ее на стерильную драпировку.
- Промыть внутрь канюли IVA с помощью mHTF путем аспирации и разрядки mHTF несколько раз.
- Аспират 100-200 мкл mHTF для заполнения кончика канюли IVA, чтобы избежать высыхания кортиковых кубиков во время загрузки(рисунок 3A).
- Загрузите кортикальные кубики в кончик канюли IVA с помощью тонкого пинцета(рисунок 3B-E).
ПРИМЕЧАНИЕ: Количество кортиковых кубиков для загрузки зависит от места прививки. Как правило, 20-30 кубиков могут быть пересажены в ортотропный оставшийся яичник, тогда как 10-15 кубиков могут быть пересажены в мешочек под серозой фаллопиевой трубы. - После загрузки кортикальных кубиков держите кончик канюли, содержащей кортикальные кубики, за пальцы до передачи канюли IVA хирургу. Это позволит избежать снижения температуры куба.
ПРИМЕЧАНИЕ: Подробности процедуры аутотрансплантата в рамках лапароскопической хирургии были сообщеныранее 19. Для пересадки корковых кубиков яичников нашим сотрудником, корпорацией Kitazato, было разработано устройство в форме канюли (IVA cannula).
4. Гистологический анализ коры яичников
ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы подсчитать количество остаточных фолликулов, выполните гистологический анализ, как описаноранее 15.
- Перед фиксацией образца пометьте поверхность кортикальной полосы красителем для маркировки ткани. Это укажет сторону коры в полосе для гистологии.
- Зафиксируйте полоски тканей на ночь при 4 °C с помощью раствора Буэна.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для обнаружения атретических фолликулов мы не рекомендуем использовать параформальдегид для фиксации, чтобы избежать усадки цитоплазмы ооцитов. - Обезвоживать и встраивать тканевые полоски в парафин.
- Последовательно разделять парафиновый блок, содержащий образец ткани.
- Окрашивайте каждый участок, используя гематоксилин и эозин для визуализации фолликулов.
- Подсчитайте фолликулы, как описаноранее 17.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
В первой публикации подхода IVA15мы пересадили корковые кубики яичников один за другим в места пересадки при лапароскопической хирургии(рисунок 1A). Поскольку было использовано 100-150 кубиков яичников, для пересадки тканей при лапароскопической операции потребовалось 3-4 часа. Кроме того, некоторые кубики яичников были потеряны перед пересадкой. Поскольку канюля IVA могла передавать 20-30 кубиков в место прививки за один раз(рисунок 1B),мы могли бы сократить время работы до 1-2 часов. Кроме того, канюля IVA может устранить потерю корковых кубиков яичников во время операции.
Рисунок 1:Эффективность канюли IVA. ( А )Предыдущийметод с пересадкой кортикальных кубиков яичников один за другом с использованием щипцов. (B) Современный метод с пересадкой 20-30 кубиков за один раз с использованием канюли IVA. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2:Рассечение ткани яичников для безмедикаментозной ИВА. (A) Кусочек коры яичников помещают в пластиковую посуду, содержащую mHTF при 37 °C.(B)Для удаления остаточных тканей продолговатого мозга кору яичников помещают на увлажненный марлю. (C) Ткань продолговатого мозга удаляется с помощью тонких микроножиц. (D)Толщина коры, которую необходимо подготовить, составляет от 1 до 2 мм.(E)После удаления ткани продолговатого мозга 1 мм x 1 мм x 5 мм куска ткани из каждой полоски коры яичника рассекается для гистологического анализа. (F)Рассеченная ткань хранится в пробирке 1,5 мл, содержащей mHTF при 4 °C до фиксации для гистологии. (G и H) Кору яичников разрезают на полоски 1 мм х 1 мм х 10 мм, а затем далее разрезают на мелкие кубики 1 мм х 1 мм х 1 мм с помощью тонкого скальпеля. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3:Аутоплантат корковых фрагментов яичников. (A) Перед загрузкой кубиков 100-200 мкл mHTF аспирируется для заполнения кончика канюли IVA, чтобы избежать высыхания кортикальных кубиков во время загрузки (B-E) Загрузка корковых кубиков яичников в кончик канюли IVA. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этой рукописи мы показали подробный лабораторный протокол для IVA без лекарств. Безлекарствующий IVA - это новый подход к лечению бесплодия для пациентки POR с уменьшающимся овариалистным резервом для стимулирования роста вторичных фолликулов, что приводит к образованию более зрелых ооцитов после стимуляции яичников и увеличению при успешной беременности20. У 15 пациенток POR с уменьшающимся овариалистным резервом этот подход достиг одной спонтанной беременности, экстракорпоральное оплодотворение-перенос эмбрионов позволило четырем живорождениям вместе с одной продолжающейся беременностью19.
Для подготовки к пересадке коры яичников ткань продолговатого мозга удаляли с помощью микроножников толщиной 1-2 мм. Ранее мы продемонстрировали, что первичные, первичные и большинство вторичных фолликулов располагались в пределах 1 мм толщиной от поверхности коры яичников у пациенток с нормальным овариальным резервом21. У пациенток с POI мы обнаружили, что вторичные фолликулы расположены глубже 1 мм, но в пределах 2 мм от поверхности коры яичников21. Известно, что антральные фолликулы расположены в тканях продолговатого мозга21,но фолликул не был обнаружен в тканях продолговатого мозга у пациентов с POI21. Хотя пациентки с ПОР с уменьшающимся овариальным резервом могут иметь антральные фолликулы в ткани продолговатого мозга, антральные фолликулы трудно выжить после пересадки из-за отсутствия связи кровеносных сосудов22. Поэтому мы определили толщину коры яичников в 1-2 мм, и критическим шагом в протоколе является не сделать кортикальные полоски < 1-2 мм, чтобы избежать потери драгоценных остаточных фолликулов. При приготовлении кортиковых полосок и кубиков мы использовали mHTF, но можно использовать аналогичную среду, которая включает в себя буфер 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинетанасульфоновой кислоты (HEPES).
В этой процедуре мы пересадили кору яичников после разрезания ее на 1 мм3 кубика15,20. Из-за сложности обработки таких мелких фрагментов для пересадки, предыдущая пересадка кубиков яичников один за другим при лапароскопической операции заняла 3-4 часа, причем некоторые кубики иногда терялись во время операции. После разработки канюли IVA мы могли бы сократить время операции до 1-2 часов, что привело к минимизации инвазивности операции, чтобы позволить безледипликационной IVA стать одной дневной операцией. Кроме того, мы могли бы устранить потерю корковых кубиков яичников во время операции. Из-за ограниченного количества фолликулов в коре яичников у пациенток с ПОР с уменьшающимся овариальным резервом важно избегать потери корковых кубиков яичников. Если канюля IVA недоступна, вы можете попытаться найти аналогичную канюлю, чтобы ее можно было использовать при лапароскопической хирургии.
Снижение функции яичников прогрессивно обусловлено старением и некоторыми патофизиологическими состояниями 23,24,25. Таким образом, у незамужних женщин с тяжелой дисфункцией яичников сохранение фертильности важно для обеспечения будущей беременности. Для этих пациенток методами криоконсервации ооцитов или ткани яичника было сообщено26,27,28,29. Хотя криоконсервация ооцитов является признанным методом сохранения фертильности1,2,эти пациентки могут иметь очень ограниченное количество извлекаемых ооцитов даже после гиперстимуляции яичников из-за низкого овариального резерва. Кроме того, у стареющих пациенток с дисфункцией яичников сообщалось о высокой частоте хромосомных аномалий в овулированных ооцитах26,30. Это приводит к необходимости проведения нескольких дорогостоящих процедур для обеспечения достаточного количества ооцитов, гарантирующих беременность. Для решения этих проблем мы разработали безледицный подход IVA для увеличения количества зрелых ооцитов для извлечения ооцитов. Поскольку криоконсервация ооцитов больше не является экспериментальным методом31,32,ожидается, что безмедикаментозная ИВА с последующей криоконсервацией ооцитов станет многообещающим методом сохранения фертильности у незамужних женщин с тяжелой дисфункцией яичников. Тем не менее, будущие клинические исследования с использованием замороженных-размороженных ооцитов, полученных из безмедикаментозного IVA, потребуются для определения эффективности этого подхода для сохранения фертильности у незамужних женщин с тяжелой дисфункцией яичников.
В заключение, мы разработали безмедикаментозный IVA как новый подход к лечению бесплодия для пациентки POR с уменьшающимся оварианским резервом и показали подробный лабораторный протокол, чтобы иметь возможность повторять наши процедуры. Методологическими ограничениями безлецовых ИВА являются трудности в прогнозировании остаточного числа фолликулов до операции, а также неспособность оценить выживаемость трансплантата. Лабораторная методика безмедикаментозной ИВА может стать основой будущего применения культуры ткани яичников для получения зрелых ооцитов без прививки.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы подтверждают, что у них нет конфликта интересов.
Acknowledgments
Мы благодарим Тацудзи Ихану, Сачиё Куримото, Кадзуко Такахасиха, Юки Йошизаву, Махо Араши, Кентаро Фудзиту, Эрину Кудо, Юку Куримото и Маюко Вакацуки за поддержку безмедикаментозной процедуры IVA и профессора Аарона Дж.В. Хсуэ (Медицинская школа Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния) за критическое чтение и редактирование рукописи. Мы также благодарим Ребекку Трумэн и Грегори Трумэна за вставку английского повествования. Это исследование было поддержано Японским обществом содействия науке (JSPS), Scientific Research B (19H03801) и Challenging Exploratory Research (18K19624).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4.5 onz specimen container | FALCON | 354013 | Other products may also be suitable |
| 60mm dish | FALCON | 351007 | Other products may also be suitable |
| 50 x 50 cm sterile drape | HOGY Medical | SR-823 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Disposable pippete | FALCON | 357575 | Other products may also be suitable |
| Fine scissors, Curved | WPI | #14224-G | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Hot plate | TOKAI HIT | TPiE-SP | Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation |
| Human Serum Albumin Solution | Irvine Scientific | 9988 | Medium for handling ovarian tissue |
| IVA cannule | KITAZATO | 446030 IVA-6030E | Specific cannula for tissue autografting |
| KAI medical Disposable scalpel | WPI | #5 10-A | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Micro scissors, Curved | WPI | #503364 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Modified HTF Medium-HEPES | Irvine Scientific | 90126 | Medium for handling ovarian tissue |
| Sterile gauze | Osaki Medical | 15004 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Swiss Tweezers, Curved Tips | KAI | #504505 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
References
- Liang, T., Motan, T. Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation. Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).
- Yoon, T. K., et al. Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program. Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).
- Donnez, J., et al. Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue. Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).
- Meirow, D., et al. Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy. New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).
- De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C.
- Scott, R. T., et al. Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome. Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).
- Ferraretti, A. P., et al. ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria. Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).
- Huhtaniemi, I., et al. Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency. Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).
- Męczekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach. Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).
- Baker, V. Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency. Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).
- Englert, Y., Govaerts, I. Oocyte donation: particular technical and ethical aspects. Human Reproduction. 13, Suppl 2 90-97 (1998).
- Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. Oocyte donation: ethical aspects related to the donor. Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).
- Storgaard, M., et al. Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis. BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).
- Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus. Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).
- Kawamura, K., et al. Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment. Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).
- Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C.
- Li, J., et al. Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).
- Suzuki, N., et al. Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency. Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).
- Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility. Fertility and Sterility. , (2020).
- Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve. Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).
- Haino, T., et al. Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification. Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).
- Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C. Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).
- Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities. Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).
- Domniz, N., Meirow, D. Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases. Best Practice & Research: Clinical Obstetrics & Gynaecology. 60, 42-55 (2019).
- Laven, J. S.
- Grynberg, M., et al.
- Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).
- Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer. Obstetrics & Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).
- Donnez, J., Dolmans, M. M. Ovarian tissue freezing: current status. Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).
- Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure. Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).
- De Munck, N., Vajta, G. Safety and efficiency of oocyte vitrification. Cryobiology. 78, 119-127 (2017).
- Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. Oocyte cryopreservation: where are we now. Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).
