Name: Ladesione e aggregazione piastrinica in condizioni di flusso utilizzando celle di flusso Microfluidic (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-27T07:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Scopri l'adesione e l'aggregazione piastrinica in condizioni di flusso fisiologico utilizzando il sistema BioFlux con canali microfluidici rivestiti di collagene. Questo metodo ad alto rendimento consente studi quantitativi sulla funzione piastrinica e lo screening di composti farmacologici.

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Parte 1: Preparazione dei canali microfluidica di un piatto BioFlux. <ol><li> Prima di eseguire l'esperimento cella di flusso, si ha la necessità di preparare i canali microfluidica con un rivestimento di proteine ​​di interesse. In questo caso, collagene I verrà utilizzato. Ogni canale ha un ingresso e una presa bene. Per questo piatto, l'ingresso è ben a sinistra e che alimentano il canale e la presa bene è sulla destra. </li><li> Diluire il collagene I (5mg/ml stock) rivestimento di concentrazione 200μg/ml 0.02M in acido acetico. Si dovranno 20μl per ogni canale utilizzato. Miscelare triteration dolce con una punta micropipetta. </li><li> Aggiungere 20 ml di rivestimento a ciascun canale rispettivo da utilizzare. Bisogna distribuire il liquido in a pugni interno della presa di alimentazione e il canale microfluidica di interesse utilizzando una micropipetta. Evitare l'introduzione di bolle, non spingere l'aria fuori della pipetta. Comprendono un canale senza collagene per un alcun controllo collagene (un controllo negativo per l'adesione e l'aggregazione). </li><li> Collegare l'interfaccia alla piastra per primo dito stringendo le 4 viti e poi una volta che sono tutti insieme, utilizzare il driver di coppia per stringere completamente. Il driver di coppia scatterà quando raggiunge la massima tenuta. </li><li> Utilizzando la modalità manuale nel software BioFlux, applicare perfusione ai canali di interesse a 2dyn/cm 2-dalla presa bene. Qui si deve guardare per il pugno opposto interno da riempire con liquido. Ciò richiederà alcuni minuti. Né si può guardare questa verifica utilizzando un obiettivo a basso consumo su un microscopio (4X) e trovare l'insenatura bene o tenendo premuto il piatto e guardando nei pozzi di aspirazione dal basso. Prima cosa si dovrebbe vedere una goccia piccola di liquido che riempie lentamente il pugno interiore. Una volta che il pugno di ingresso interno è pieno, interrompere la perfusione in una sola volta premendo sosta nel software. </li><li> Incubare la piastra a temperatura ambiente per un'ora. </li><li> Rimuovere l'interfaccia e aggiungere 1 ml di PBS (più di Ca 2 + / Mg 2 +) alla presa bene. Avviare perfusione dalla presa bene a 2dyn/cm 2. Continua perfusione per 10 minuti. Smettere di perfusione e rimuovere l'interfaccia. </li><li> Rimuovere l'eccesso di PBS sia da pozzi di aspirazione e scarico - non rimuovere il liquido che riempie il punzone interiore. Bloccare i canali con soluzione bloccante (0,5% v / v BSA in PBS (più di Ca 2 + / Mg 2 +)). Aggiungere 1 ml di soluzione di blocco per ogni presa bene da utilizzare e profumato dalla presa bene a 2dyn/cm 2. Continua perfusione per 10 minuti. Smettere di perfusione e rimuovere l'interfaccia. Canali disposti a questo passo può essere utilizzato tutto il giorno. </li><li> Prima di aggiungere sangue, rimuovere il liquido su entrambi i lati del canale, tranne per i pugni interiore. </li></ol> Parte 2. Preparazione del sangue con GP IIb / IIIa anticorpi inibitori. <ol><li> Mentre il collagene è incubando nei canali, bisogna preparare il sangue intero. Si dovrebbe seguire le norme di biosicurezza dettato dal suo / sua istituto durante la manipolazione del sangue umano. </li><li> Fresco sangue umano (da un individuo a digiuno) coinvolto in anticoagulante citrato di sodio deve essere utilizzato entro 3 ore dalla raccolta. </li><li> Preparare il sangue con l'aggiunta di 4 _m calceina AM. Preparare una 4mm stock di AM in DMSO calceina e aggiungere al sangue a una diluizione di 1 / 1000 v / v. Mescolare delicatamente per inversione. </li><li> Dispensare 1 ml di calceina AM etichettato sangue in 10 - microprovette 1,5 ml. Aggiungi GP IIb / IIIa anticorpi inibitori a ciascuna alla diluizione desiderata (il peso molecolare di IgG è ~ 150kDa). Un esempio è la serie di diluizioni da 1200nm a 9nM e include un anticorpo alcun controllo e un controllo degli anticorpi non correlati. Un eccellente controllo positivo per l'inibizione sarebbe ReoPro (Abciximab, Eli Lilly) ad una concentrazione di 20ug/ml. Mescolare delicatamente per inversione. </li><li> Incubare a temperatura ambiente per 1 ora. Mescolare delicatamente per inversione ogni 10 minuti. </li></ol> Parte 3: L'esecuzione dell'esperimento cella di flusso sulla workstation BF1000. <ol><li> In primo luogo, è necessario predisporre un protocollo automatizzato nel modulo di controllo BioFlux. Per il collagene I, si dovrebbe istituire un protocollo per eseguire 10dyn/cm 2 per 10 minuti dalla presa bene. A questo punto, si dovrebbe anche impostare i parametri di acquisizione dati utilizzando la workstation BF1000, comprese le posizioni di canale, la cattura di lunghezza d'onda FITC e time-lapse informazioni. Si raccomanda di catturare 3 campi di vista con un obiettivo 10x per canale ogni 30 secondi per una durata di 10 minuti totali. </li><li> Lavorando velocemente, luogo 500ul di sangue preparato di ogni condizione in canali separati preparati. Luogo nessun controllo del sangue degli anticorpi in un canale che è rivestito con collagene e uno che è appena bloccato. </li><li> Posizionare l'interfaccia sul piatto. </li><li> Posizionare la piastra su microscopio workstation BF1000. Morsetto sull'interfaccia. </li><li> Eseguire la regolazione del carico piatto. Inoltre, passare ad una fase sangue pozzetto contenente. Set FTIC immagine parametri di acquisizione (tempo di esposizione, guadagno, ecc ...). </li><li> Nel software BioFlux montaggio, inizia l'acquisizione per iniziare il flusso e l'acquisizione contemporaneamente. </li><li> Rimuovere la piastra da BF1000 workstation, smaltire piastra secondo le linee guida istituzionali. </li></ol> Parte 4: Risultati Rappresentante. Qui il protocollo per l'adesione e aggregazione piastrinica nei canali microfluidica è stato presentato. Il trattamento con un inibitore dell'aggregazione piastrinica, anti-GPIIb/IIIa è stato anche incluso nel protocollo. Utilizzando collagene canali rivestiti microfluidica del sistema BioFlux, ci si dovrebbe aspettare di vedere aggressivo formazione di trombi nel tempo con il campione di sangue di controllo non trattato e senza formazione di trombi sul canale non rivestito. In un esperimento effettuato di recente, la dimensione media degli aggregati in condizioni di controllo è stato 2000μm 2. Figura 1. <img src="/files/ftp_upload/1644/1644fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"> Attivato glicoproteina IIb / IIIa è potente mediatore di piastrine-piastrine interazioni e aggregazione di stabilizzazione 1. Adesione al collagene attiva la glicoproteina IIb / IIIa complesso per suscitare questa reazione 2. Dopo l'incubazione con anti-GPIIb/IIIa per 1 ora prima dell'esposizione al taglio, ci si dovrebbe aspettare di osservare una diminuzione della dimensione di trombi così come una diminuzione della frequenza di formazione di trombi. Una risposta dose-dipendente in genere può essere osservato a 10dyn/cm 2. Figura 2. <img src="/files/ftp_upload/1644/1644fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"> Il valore 50 IC per questo inibitore particolare è stato 17nM a 10 dyn / cm 2. L'inibizione massima (per questo donatore) rispetto al non controllo degli anticorpi è stata dell'11% a 10 dyn / cm 2. Mentre i metodi qui sono stati presentati con una specifica proteina della matrice extracellulare e di uno specifico inibitore dell'aggregazione piastrinica, il protocollo è estensibile ad altri rivestimenti, altri tipi di cellule e altri inibitori per saggi di adesione cellulare. Gli ingredienti chiave del successo di tali esperimenti siano evitare bolle nei canali microfluidica, la diluizione corretta di tutti i reagenti nei diluenti corretta e condizioni di incubazione appropriate per tutti i reagenti.

<ol><li>Jackson, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+growing+complexity+of+platelet+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The growing complexity of platelet aggregation.</a> Blood. 109, 5087-5095 (2007).</li>
<li>Nakamura, T., Kambayashi, J., Okuma, M., Tandon, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+GP+IIb-IIIa+complex+induced+by+platelet+adhesion+to+collagen+is+mediated+by+both+alpha2beta1+integrin+and+GP%5BTitle%5D)+AND+%22VI.+J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Activation of the GP IIb-IIIa complex induced by platelet adhesion to collagen is mediated by both alpha2beta1 integrin and GP.</a> VI. J Biol Chem. 274, 11897-11903 (1999).</li>
</ol>

Gli autori che contribuiscono sono dipendenti di Bioscienze flussione.

Mentre i metodi qui sono stati presentati con una specifica proteina della matrice extracellulare e di uno specifico inibitore dell&#39;aggregazione piastrinica, il protocollo è estensibile ad altri rivestimenti, altri tipi di cellule e altri inibitori per saggi di adesione cellulare. Gli ingredienti chiave del successo di tali esperimenti siano evitare bolle nei canali microfluidica, la diluizione corretta di tutti i reagenti nei diluenti corretta e condizioni di incubazione appropriate per tutti i reagenti.

<table><tbody><tr><td>collageno I, bovino</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>A1064401</td><td>possono essere utilizzate altre fonti di collageno I</td></tr><tr><td>PBS con Ca/Mg</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>14040-117</td><td></td></tr><tr><td>albumina sierica bovina (BSA)</td><td>Reagente</td><td>EMD Millipore</td><td>EM-2930 Bottom of Form</td><td>Disponibile presso VWR</td></tr><tr><td>calceina AM</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>C1430</td><td>È possibile utilizzare anche calceina AM da BD</td></tr><tr><td>Sistema BioFlux 1000</td><td>Reagente</td><td>Fluxion Biosciences</td><td>Contattare l'azienda</td><td></td></tr><tr><td>Piastra BioFlux</td><td>Reagente</td><td>Fluxion Biosciences</td><td>900013</td><td></td></tr><tr><td>antiGPIIb/IIIa</td><td>Reagente</td><td>Abcam</td><td>ab33407</td><td>un numero alternativo è ab15021</td></tr><tr><td>ReoPro</td><td>Reagente</td><td>Eli Lilly</td><td></td><td>disponibile solo su prescrizione medica</td></tr></tbody></table>

l&#39;adesione e aggregazione piastrinica in condizioni di flusso utilizzando celle di flusso microfluidic

Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells

L&#39;aggregazione piastrinica si verifica in risposta al danno vascolare, dove la matrice extracellulare sotto l&#39;endotelio è stato esposto. La cascata l&#39;adesione delle piastrine avviene in presenza di flusso di taglio, non un fattore contabilizzati nel convenzionali (statici) ben piastra saggi. Questo articolo riporta una aggregazione delle piastrine-test utilizzando un microfluidica ben piastra formato di emulare fisiologiche condizioni di flusso di taglio. Proteine ​​extracellulari, collagene I e fattore di von Willebrand sono depositate all&#39;interno del canale microfluidico con perfusione attivo con una pompa pneumatica. Le proteine ​​della matrice vengono poi lavate con tampone e bloccato per preparare il canale microfluidica per le interazioni delle piastrine. Di sangue intero marcato con colorante fluorescente è perfuso attraverso il canale a portate diverse al fine di ottenere l&#39;attivazione piastrinica e aggregazione. Gli inibitori dell&#39;aggregazione piastrinica può essere aggiunta prima dell&#39;esperimento cella di flusso per generare IC50 dati dose-risposta.

La cascata l&#39;adesione delle piastrine avviene in presenza di flusso di taglio, non un fattore contabilizzati nel convenzionali (statici) ben piastra saggi. Questo articolo riporta una aggregazione delle piastrine-test utilizzando un microfluidica ben piastra formato di emulare fisiologiche condizioni di flusso di taglio.

L&#39;adesione e aggregazione piastrinica in condizioni di flusso utilizzando celle di flusso Microfluidic

L'aggregazione piastrinica avviene in risposta a un danno vascolare in cui la matrice extracellulare sottostante l'endotelio è stata esposta. L'adesione piastrinica...

Il sistema Bio Flux è uno strumento automatizzato e un dispositivo microfluidico per eseguire saggi su cellule vive in condizioni di flusso controllato. Questo sistema utilizza una tecnologia microfluidica basata su piastre a pozzetti per integrare dispositivi di flusso su scala micrometrica in piastre a pozzetti standard SBS. BioFlex può essere utilizzato per condurre studi sull'adesione e l'aggregazione delle piastrine con elevata produttività e ridotti volumi di sangue.Del sangue intero marcato con un colorante fluorescente viene aggiunto alle pozzette e quindi fatto fluire attraverso i canali. In condizioni di flusso tagliente controllato, vengono prodotti dati microscopici ad alta risoluzione, che quantificano l'adesione e l'aggregazione delle piastrine in presenza di composti farmacologici e altri parametri variabili. Ciao, sono Mike Schwartz del laboratorio di R&S di Flexion Biosciences.Oggi vi mostreremo un procedimento per l'utilizzo di celle a flusso microfluidiche in saggi di adesione delle piastrine. Utilizziamo questo protocollo nel nostro laboratorio per una varietà di saggi di biologia vascolare. Cominciamo dunque.Prima di eseguire l'esperimento con la cella a flusso, i canali microfluidici della piastra Bio Flux devono essere preparati con un rivestimento proteico di interesse; in questo esperimento verrà utilizzato collagene di tipo I. Ciascuno dei 24 canali sperimentali della piastra Bio Flux è collegato a una pozzetta di ingresso e a una pozzetta di uscita. La pozzetta di ingresso è quella a sinistra, che alimenta il canale, mentre la pozzetta di uscita si trova a destra; diluire la soluzione madre di collagene di tipo I fino a una concentrazione di 200 microgrammi per millilitro.In acido acetico 0,02 molare, saranno necessari 20 microlitri per ogni canale utilizzato. Poiché questo esperimento richiede 11 canali, preparare 200 microlitri di rivestimento di collagene. Un canale rimane non rivestito, mescolato delicatamente con la punta di una micropipetta.Aggiungere 20 microlitri di rivestimento in ciascun canale corrispondente utilizzando una micropipetta per dispensare il liquido nel punch interno della pozzetta. Alimentare il canale microfluidico di interesse, come mostrato qui con il colorante giallo, includendo un canale senza collagene come controllo negativo per l'adesione e l'aggregazione delle piastrine. Dopo aver aggiunto il rivestimento di collagene a tutti i canali corrispondenti, collegare l'interfaccia alla piastra.Se si utilizza l'interfaccia bio flux 1000, è possibile bloccare entrambi i fermi sulla piastra. Se si utilizza l'interfaccia Bio flux 200, stringere prima con le dita le quattro viti. Successivamente, una volta posizionate tutte, utilizzare il chiavino dinamometrico per serrare completamente.Il chiavino dinamometrico emetterà un clic quando raggiunge il massimo. Utilizzando la modalità manuale nel software bio flux, applicare la perfusione ai canali di interesse a 2D per centimetro quadrato a partire dall'uscita. Utilizzeremo un obiettivo a basso ingrandimento su un microscopio per individuare il pozzetto di ingresso e osservare il riempimento del foro interno opposto con liquido.Dovrebbe innanzitutto osservare una piccola goccia di liquido che lentamente riempie l'ago interno dopo alcuni minuti; quando l'ago interno di ingresso è pieno, arrestare il flusso su tutti i canali premendo stop nel software. Incubare la piastra a temperatura ambiente per un'ora. Durante questo periodo di incubazione, è possibile iniziare a preparare il sangue intero alla fine dell'incubazione di un'ora.Dopo aver preparato il sangue, rimuovere l'interfaccia e aggiungere un millilitro di PBS contenente ioni calcio e magnesio all'uscita. Iniziare la perfusione dal pozzetto di uscita a due dyne per centimetro quadrato e continuare la perfusione per 10 minuti. Dopo 10 minuti, arrestare la perfusione. Dopo aver rimosso l'interfaccia, eliminare il PBS in eccesso sia dai pozzetti di ingresso che di uscita.Non rimuovere mai il liquido che riempie l'ago interno. Per bloccare i canali, aggiungere un millilitro di soluzione di blocco a ciascun pozzetto di uscita. Il pozzetto da utilizzare deve essere perfuso a partire dal pozzetto di uscita a due dine per centimetro quadrato e continuare la perfusione per 10 minuti.Interrompere la perfusione dopo 10 minuti e rimuovere l'interfaccia. I canali sono ora pronti e possono essere utilizzati per tutto il giorno mentre la piastra viene rivestita con collagene. Durante un'incubazione di un'ora, deve essere preparato sangue umano fresco proveniente da un soggetto a digiuno per l'analisi mediante imaging e per l'infusione nella piastra.Il sangue deve essere prelevato in citrato di sodio, anticoagulante, e utilizzato entro tre ore dal prelievo. Per prima cosa, aggiungere un stock di calcio da quattro millimolari in DMSO al sangue in una diluizione di uno a mille in volume su volume. Per ottenere una concentrazione di quattro micromolari di calcio, mescolare mediante inversione delicata.Successivamente, distribuire un millilitro del sangue etichettato con calcio am in dieci microtubi da uno virgola cinque millilitri. Aggiungere a ogni tubo l'anticorpo inibitore GP2B3A al diluizione desiderata. Assicurarsi di includere un controllo negativo senza anticorpo e un controllo positivo con anticorpo non correlato, mescolando delicatamente mediante inversione.Incubare i tubi a temperatura ambiente per un'ora, mescolando con inversioni delicate ogni 10 minuti prima di eseguire l'esperimento con la cella a flusso. Nel modulo di controllo Bio Flux deve essere impostato un protocollo automatizzato per il collagene.One. Impostare un protocollo per far scorrere il sangue a dieci nove centimetri quadrati per 10 minuti a partire dall'uscita.Beh, utilizzando la stazione di lavoro BioFlex 1000, è necessario impostare i parametri di acquisizione dati, che includono l'acquisizione delle posizioni desiderate della piastra alla lunghezza d'onda fitz e l'impostazione per acquisizioni temporizzate. Un piano tipico di acquisizione immagini per questo protocollo prevede un campo visivo per canale da acquisire ogni 30 secondi mediante un obiettivo 10x per una durata totale di 10 minuti. Sono inoltre possibili ulteriori campi visivi e diverse impostazioni di acquisizione temporizzata.Dopo aver configurato il protocollo automatizzato e i parametri di acquisizione dei dati, tornare alla piastra BioFlex e rimuovere il liquido da entrambi i lati del canale, lasciando solo le punzonature interne. Avendo cura di lavorare rapidamente, aggiungere 500 microlitri di sangue per ogni condizione nei pozzetti di uscita di ciascun canale. Si noti che i pozzetti di uscita vengono utilizzati per somministrare il sangue poiché rappresentano il percorso più breve verso la zona di osservazione e garantiranno una reazione più immediata del sangue al rivestimento di collagene.Inoltre, posizionare il sangue di controllo senza anticorpo in un canale rivestito con collagene e in uno semplicemente bloccato. Posizionare la piastra sul microscopio della stazione di lavoro BioFlex 1000 e fissare l'interfaccia. Eseguire la calibrazione dell'elenco delle posizioni individuando il primo punto di calibrazione, definito come origine.Quindi individuare e contrassegnare il secondo punto di calibrazione. Applicare questa calibrazione all'elenco di stage appropriato. Ciò garantisce che tutte le posizioni di osservazione sulla piastra possano essere trovate automaticamente.Spostare la piastra su uno dei canali contenenti sangue e impostare i parametri di acquisizione delle immagini, come il tempo di esposizione e il guadagno, nel software BioFlex montage. Avviare il flusso di lavoro appropriato cliccando sul pulsante desiderato. Questo avvierà contemporaneamente il protocollo di flusso e l'acquisizione delle immagini.Al termine dell'esperimento, rimuovere la piastra dalla stazione BIOFLU 1000 e smaltirla secondo le linee guida istituzionali. Utilizzando canali microfluidici rivestiti con collagene del sistema bio flux. Si osserva nel tempo una formazione aggressiva di trombi con il campione di sangue di controllo non trattato.Al contrario, non si osserva formazione di trombi nel canale non rivestito. In un esperimento recentemente eseguito, la dimensione media degli aggregati in condizioni di controllo era di 2000 micrometri quadrati. GP due B tre A è un mediatore potente delle interazioni tra piastrine e della stabilizzazione dell'aggregazione, quando viene attivato dall'adesione al collagene; come mostrato qui dopo incubazione con anticorpo anti-GP due B tre A per un'ora prima dell'esposizione al flusso di taglio, si osserva una riduzione della dimensione dei trombi così come una diminuzione della frequenza di formazione dei trombi.Una risposta dipendente dalla dose può generalmente essere osservata a dieci centimetri quadrati e il valore di IC 50 per questo particolare inibitore era di 17 nanomolar. L'inibizione massima per questo donatore, rispetto al controllo senza anticorpo, era dell'11% a 10 centimetri quadrati. È inoltre disponibile una piastra ad alto taglio da 48 pozzetti per eseguire esperimenti con sangue intero fino a 200 D per centimetro quadrato o 5.000 al secondo.Abbiamo appena mostrato come utilizzare canali di flusso microfluidici per condurre esperimenti di biologia vascolare fisiologicamente rilevanti. Quando si esegue questo protocollo, è importante ricordare di diluire il collagene nel tampone corretto. Utilizzare sempre una tecnica di pipettaggio corretta per evitare l'introduzione di bolle d'aria e seguire sempre le norme di biosicurezza del proprio laboratorio.Ecco fatto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Stiamo descrivendo un metodo per soggetto cellule aderenti alle sollecitazioni di taglio a flusso laminare in un circuito sterile flusso continuo. L'adesione delle cellule ', morfologia possono essere studiati attraverso la camera trasparente, campioni ottenuti dal circuito per l'analisi metabolita e le cellule raccolte dopo l'esposizione di taglio per gli esperimenti futuri o della cultura.

Piatti paralleli Camera Flow e circuito a flusso continuo per valutare le cellule progenitrici endoteliali sotto sforzo di taglio a flusso laminare

Source: Claes, J., et al, In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method for studying host-pathogen interactions using a micro-parallel plate flow chamber seeded with human primary endothelial cells. Following endothelial cell activation by an ionophore and perfusion with fluorescently labeled bacteria, the cells release von Willebrand factor (VWF), which binds bacterial adhesins under shear...

Micro-Parallel Plate Flow Chamber Model for Studying Bacterial Adhesion to Human Endothelial Cells

Questo video mostra un test basato sul flusso laminare per caratterizzare l'interazione tra leucociti e partner cellulari come le cellule endoteliali. Questo metodo fornisce informazioni dinamiche sull'adesione, la deadesione e la trasmigrazione dei leucociti quando perfusi su uno strato intatto e confluente di cellule vascolari.

Un test basato sul flusso laminare per studiare le interazioni tra leucociti e cellule endoteliali

Le camere di flusso utilizzate negli esperimenti di adesione sono tipicamente costituite da percorsi di flusso lineari e richiedono più esperimenti a diverse velocità di flusso per generare una mappa di adesione a taglio.  SynVivo-SMN consente la generazione di mappe di adesione al taglio utilizzando un singolo esperimento che utilizza volumi di microlitri, con conseguente notevole risparmio di tempo e materiali di consumo.

Generazione di Shear Adesione mappa usando SynVivo reti microvascolari sintetico

È riportato un metodo di quantificazione neutrofili. Questo metodo crea un ambiente di flusso dinamico simile a quello riscontrato in un vaso sanguigno. Permette la ricerca di neutrofili adesione a entrambi le molecole purificate di adesione (ligando) o substrato di cellule endoteliali (HUVEC) in un contesto simile all'ambiente in vivo con lo stress puro.

Umano camera di flusso neutrofili saggio

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Microfluidic Flusso Camere con sangue ricostituito al modello Emostasi e piastrine Transfusion<em&gt; In Vitro</em

Questo articolo descrive un modello sperimentale di emostasi che misura contemporaneamente la funzione piastrinica e la coagulazione. Piastrine e di fibrina fluorescenza viene misurata in tempo reale, e il tasso di piastrine di adesione, il tasso di coagulazione, e l'inizio della coagulazione sono determinati. Il modello viene utilizzato per determinare le proprietà delle piastrine procoagulanti sotto flusso nei concentrati di trasfusione.

Un Microfluidic flusso Camera Modello per la trasfusione di piastrine e Emostasi Misure Deposizione delle piastrine e la formazione di fibrina in tempo reale

Questo lavoro descrive un metodo basato sulla microscopia a fluorescenza per lo studio dell'adesione piastrinica, della diffusione e della secrezione sotto flusso. Questa piattaforma versatile permette di studiare la funzione piastrinica per la ricerca meccanicistica sulla trombosi e sull'emostasi.

Imaging di cellule vive di degranulazione piastrinica e secrezione sotto flusso

Leucociti avidamente interagiscono con le cellule vascolari e le piastrine dopo lesione di parete del vaso o durante l'infiammazione. Qui, descriviamo un semplice test a flusso laminare per caratterizzare i meccanismi molecolari che sono alla base delle interazioni tra leucociti ed i loro partner cellulari.

Analisi di flusso laminare-based per indagare il reclutamento leucocitario su cellule vascolari coltivate e piastrine aderenti

Viene fornito un protocollo dettagliato per l'imaging di singole piastrine in migrazione utilizzando cavi avidina-biotina funzionalizzati con RGD con densità regolabile, rivelando che le piastrine generano una forza sufficiente per rompere il legame avidina-biotina.

Un test in vitro per studiare la migrazione piastrinica utilizzando tethers avidina-biotina funzionalizzati con RGD

La funzione piastrinica sotto flusso può essere valutata e la rianimazione emostatica simulata può essere modellata utilizzando un dispositivo microfluidico, che ha applicazioni nella medicina traumatologica e trasfusionale.

Microfluidica nella valutazione della funzione piastrinica

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L'adesione e aggregazione piastrinica in condizioni di flusso utilizzando celle di flusso Microfluidic

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