MALDI Preparazione del campione: il metodo ultra sottile strato

Benvenuti nel tutorial di CHI Lab sul metodo degli strati ultrasottili, particolarmente utile per la determinazione accurata della massa delle proteine. A causa della natura sensibile della spettrometria di massa, utilizziamo solo reagenti di grado HPLC e guanti in lattice o nitrile senza polvere per pulire la piastra. Sciacquare alternativamente con acqua di metanolo e infine di nuovo metanolo.

Tra un risciacquo e l'altro, rimuovere delicatamente il solvente in eccesso utilizzando un panno per lenti. È possibile ripetere questi passaggi di lavaggio tutte le volte necessarie per produrre una piastra pulita. E una volta pulita e asciutta, la piastra deve essere utilizzata immediatamente.

Applicare e distribuire da 20 a 30 microlitri di soluzione di substrato a strato sottile sulla lastra MALDI pulita. Qui usiamo una punta per pipetta P due 50 per distribuire uniformemente la soluzione evitando di graffiare la piastra. Man mano che lo strato sottile si asciuga, rimuovere eventuali goccioline d'acqua rimanenti, se presenti, tamponando delicatamente con una salvietta kim.

Quindi strofinare delicatamente la piastra con un movimento fluido con una salvietta Kim per formare correttamente lo strato sottile. Infine, pulire i bordi della piastra per evitare di contaminare lo spettrometro di massa. È fondamentale testare lo strato sottile prima di applicare il campione.

Se il punto di prova impiega troppo tempo ad asciugarsi in cui i cristalli non sono omogenei, il problema potrebbe risiedere nello strato sottile stesso o nella soluzione della matrice, pulire la piastra, riapplicare lo strato sottile e ripetere il test. Quando si macchia lo strato sottile, non si desidera che le macchie evaporino fino alla secchezza. Piuttosto, una volta che la cristallizzazione è rallentata e si è fermata, rimuovere il solvente in eccesso.

Utilizzando un aspiratore a vuoto, la presenza di contaminanti come sali e detergenti, nonché un'elevata concentrazione di analiti possono interferire con la cristallizzazione. Un'ulteriore diluizione del campione può migliorare la cristallizzazione Individuare le formiche nelle immediate vicinanze del campione. Ciò consentirà una pseudo calibrazione interna in cui la piastra viene spostata dal punto del campione al punto di calibrazione.

Durante l'acquisizione del campione, aggiungendo alcuni colpi laser del CAS allo spettro, questo approccio garantisce una calibrazione con precisione di massa superiore rispetto alla sola calibrazione esterna. È molto importante lavare via eventuali contaminanti come sale o detersivo che potrebbero interferire con l'analita. Ionizzazione. Per fare ciò, far cadere ghiaccio freddo, 0,1% di acido acetico Tri Fluor in HPLC, livellare l'acqua direttamente sulle macchie.

Rimuovere la soluzione di lavaggio utilizzando un aspiratore a vuoto Come mostrato qui. Questo metodo produce spettri eccellenti sia per le proteine di membrana che per quelle solubili.