C. elegans Dissezione del blastomero: un metodo per rimuovere il guscio dell'uovo e dissociare le cellule embrionali

- Per questa dissezione, utilizzare due micropipette: una con un'apertura all'incirca della stessa larghezza di un uovo e una larga il doppio, e una serie di soluzioni organizzate in pozzetti per facilitare il rapido trasferimento tra di loro.

Innanzitutto, metti gli ermafroditi adulti in una soluzione di sale d'uovo, che è osmoticamente bilanciata per evitare che gli embrioni scoppino. Taglia i vermi a metà per rilasciare gli embrioni in via di sviluppo.

Quindi, identifica gli embrioni in fase di due cellule. Queste cellule sono i blastomeri formati dalla divisione dell'ovulo fecondato. Utilizzare la micropipetta con l'apertura più grande per trasferire un embrione in una soluzione di ipoclorito, candeggina, che inizierà a rompere il guscio d'uovo protettivo.

Dopo soli 40-55 secondi, trasferisci l'embrione nel terreno di coltura di Shelton, o SGM. Lavare brevemente ogni embrione in due pozzetti di SGM per rimuovere tutte le tracce di candeggina prima di metterli in un terzo pozzetto.

Ora, usa la micropipetta più piccola per pipettare ripetutamente l'embrione fornendo la forza meccanica per rimuovere il guscio d'uovo ed esporre i blastomeri. Continuare delicatamente a pipettare l'e