Raccolta di sottopopolazioni leucemiche: un metodo per la separazione spaziale di sottopopolazioni di cellule leucemiche dalla co-coltura 2D

- Quando le cellule leucemiche vengono co-coltivate con cellule stromali mesenchimali, interagiscono con le cellule stromali e formano tre sottopopolazioni. Cellule sospese che fluttuano liberamente, cellule phase-bright aderenti alla superficie del monostrato mesenchimale e cellule phase-dim sotto il monostrato mesenchimale. Per separare ogni sottopopolazione, prelevare una piastra di coltura tissutale con un monostrato di cellule stromali mesenchimali.

Seminare le cellule leucemiche presenti nei terreni di coltura specifici per il tumore sul monostrato e incubare la piastra per la durata desiderata. Successivamente, raccogliere le cellule tumorali in sospensione pipettando le cellule che fluttuano liberamente in una provetta separata. Ora, aggiungere il terreno fresco alla piastra e pipettare energicamente per rimuovere le cellule tumorali lucide dalla superficie del monostrato mesenchimale.

Raccogliere queste cellule pipettandole in una provetta separata. Aggiungere la tripsina alla piastra per rimuovere le cellule mesenchimali aderenti. Aggiungi siero fetale bovino, o FBS, per fermare l'azione della tripsina e rompere gli aggregati cellulari. Ora, raccogli le celle a attenuazio