Separazione basata sulla cromatografia su strato sottile di nucleotidi (p)ppGpp isolati da batteri indotti da stress

Iniziare con estratti nucleotidici radiomarcati ottenuti da una coltura batterica prima e dopo l'induzione dello stress.

Sotto stress, gli enzimi batterici convertono la guanosina trifosfato e la guanosina difosfato in nucleotidi indotti dallo stress guanosina pentafosfato e guanosina tetrafosfato.

Individuare gli estratti su una piastra cromatografica a strato sottile pre-rivestita con un polimero cationico come fase stazionaria.

Posizionare la piastra in una camera contenente un tampone come fase mobile, assicurandosi che il liquido rimanga al di sotto del punto per evitare una diffusione precoce.

Consentire al tampone di risalire per azione capillare, separando i nucleotidi caricati negativamente in bande distinte in base alla loro carica e dimensione.

Dopo lo sviluppo, rimuovere la piastra, asciugare all'aria e tagliare la parte superiore per eliminare gli isotopi liberi e ridurre il segnale di fondo.

Esporre la piastra a uno schermo sensibile alle radiazioni per rilevare il segnale radioattivo.

L'aumento dei livelli di guanosina tetrafosfato e guanosina pentafosfato dopo l'induzione dello stress rivela cambiamenti dinamici nel pool di nucleotidi della guanosina.

Per prima cosa, prepar