Preparazione e trasformazione di batteri mediante elettroporazione ad alta tensione

Inizia con un tubo contenente batteri inoculati in un mezzo nutritivo.

Incubare agitando fino a quando le cellule raggiungono la fase di divisione attiva.

Centrifugare per raccogliere le cellule e scartare il surnatante.

Lavare ripetutamente le cellule con glicerolo ghiacciato per rimuovere i sali e risospendere in glicerolo per mantenere la vitalità cellulare.

Preparare un plasmide contenente un gene di resistenza agli antibiotici in acqua sterile con EDTA per prevenire la degradazione del DNA.

Mescolare la soluzione plasmidica con le cellule batteriche.

Applicare un breve impulso ad alta tensione per creare temporaneamente pori nella membrana batterica.

Ciò consente al DNA plasmidico di entrare nel citoplasma.

Trasferire immediatamente le cellule in un terreno di recupero e incubare agitandole.

I componenti del mezzo supportano la riparazione della membrana e l'espressione genica della resistenza agli antibiotici codificata da plasmidi.

Distribuire le cellule sull'agar nutriente contenente l'antibiotico e incubare fino a formare le colonie.

Scegli una singola colonia e mettila su un piatto fresco per purificare i trasformanti.

Per iniziare l'esperimento, preparare cellule elettrocompetenti d