Visualizzazione dell'infezione delle vie urinarie in un modello murino utilizzando la bioluminescenza

Inizia con un topo anestetizzato e, utilizzando un catetere, inietta una sospensione di batteri patogeni nella vescica urinaria.

Questi batteri trasportano un operone bioluminescente, che consente la produzione autonoma di luce per tracciare l'infezione.

Il rivestimento interno della vescica è un epitelio specializzato che separa il lume dal tessuto sottostante.

Le proteine di adesione batteriche si legano ai recettori glicoproteici sulla superficie epiteliale dell'ospite, scatenando l'endocitosi mediata dai recettori.

I batteri interiorizzati si replicano formando dense comunità batteriche intracellulari.

I batteri esprimono l'operone bioluminescente, che produce un enzima luciferasi e un complesso enzimatico che sintetizza il substrato della luciferasi.

La luciferasi ossida il substrato per emettere luce visibile.

Posiziona il topo all'interno della camera di imaging e cattura il segnale bioluminescente.

Seleziona una regione di interesse e quantifica l'intensità della bioluminescenza.

Monitorare questo segnale nel tempo come indicatore in tempo reale del carico batterico e della progressione dell'infezione.

Apri il software di acquisizione BLI e clicca su Inizializza nel dispositivo di imaging per testare la telecamera e il sistema di controller di palco e raffreddare la telecamera del dispositivo a carica accoppiata a meno 90 gradi Celsius. Clicca su acquisizione, salva automaticamente a. Seleziona Luminescence e fotografa. Controlla le impostazioni luminescenti predefinite impostando il filtro di eccitazione su Blocco e il filtro di emissione su Aperto.

Imposta il tempo di esposizione su automatico quando scatti la prima immagine. Per misurazioni in vivo e segnali luminosi, imposta il tempo di esposizione intorno ai 30 secondi. Riduci il tempo di esposizione se appare un avviso dovuto a un'immagine satura.

Seleziona il binning medio, F/stop uno, e scegli il FOV corretto. Imposta l'altezza del soggetto a 1 centimetro quando si fanno immagini ai topi. Immagini fino a 5 topi contemporaneamente e separi gli animali usando il deflettore luminoso per evitare la riflessione.

Chiudi la porta e clicca su Acquisisci per avviare la sequenza di immagini. Poi compila informazioni dettagliate sull'esperimento. Rimuovi i topi dalla camera di imaging e riportali nella loro gabbia. Controlla la piena guarigione dopo l'anestesia. Poi riporta le gabbie ai rack ventilati fino al prossimo ciclo di imaging.

Avvia il software di imaging e carica il file sperimentale cliccando su Sfoglia. Usa la palette degli strumenti per regolare la scala cromatica dell'immagine. Usa gli strumenti ROI per disegnare una regione di interesse sull'immagine, assicurandoti che sia abbastanza grande da coprire l'intera area e utilizzando le stesse dimensioni per tutte le immagini. Poi, clicca su misurazione ROI per quantificare l'intensità luminosa.