Modellazione della patogenesi di Aeromonas in C. elegans utilizzando un test di sopravvivenza

Si inizia con una coltura di un ceppo di Aeromonas , un patogeno batterico, coltivato in un mezzo ricco di nutrienti.

Misurare la densità ottica della coltura e regolare la concentrazione batterica per garantire un carico infettivo costante.

Placca la coltura su un substrato di crescita a nematodi o agar NGM e incuba per formare uno strato batterico uniforme.

Preparare larve di C. elegans sincronizzate nello sviluppo, un nematode batterivoro mantenuto su un mezzo arricchito.

Trasferire le larve sullo strato batterico e incubare per permettere l'ingestione orale di Aeromonas e la colonizzazione intestinale.

All'interno dell'ospite, i batteri si moltiplicano e rilasciano citotossine che danneggiano le cellule epiteliali intestinali e portano alla mortalità.

Trasferire i nematodi sopravvissuti su nuove piastre batteriche e contare quotidianamente il numero di vermi vivi, morti e non reattivi fino a quando l'ultimo verme muore.

Infine, genera una curva di sopravvivenza per valutare la vitalità dell'ospite nel tempo.

Per prima cosa, seleziona una singola colonia di ciascuno dei quattro ceppi di Aeromonas e coltivali secondo il protocollo testuale. Poi, misura l'assorbanza OD₆₀₀ del brodo batterico e regolala fino a che l'assorbanza non sia pari a 2,0.

Poi metti e spargi 30 microlitri di brodo batterico di ogni ceppo nelle piastre NGM.

Seleziona casualmente e trasferisci i vermi L4 preparati precedentemente sulle piastre NGM con i ceppi Aeromonas. Poi, incubare le placche a 20 gradi Celsius fino al completamento del saggio.

Ogni giorno trasferisci tutti i vermi viventi su una nuova piastra NGM con batteri. Conta ogni giorno il numero di vermi vivi, morti e sensori finché l'ultimo verme non è morto.