Che cos'è il campionamento di singole cellule?

Il campionamento di singole cellule è una tecnica utilizzata per isolare cellule individuali da una popolazione più ampia per un'analisi dettagliata.

Perché è importante isolare singole cellule?

L'isolamento di singole cellule permette ai ricercatori di studiare l'eterogeneità e le caratteristiche specifiche delle singole cellule all'interno di una popolazione.

Quale attrezzatura è necessaria per questa tecnica?

Un microscopio dotato di un micromanipolatore e una punta microcapillare sono essenziali per isolare singole cellule.

Come vengono conservate le cellule isolate?

Le cellule isolate sono tipicamente conservate sul ghiaccio in un buffer di raccolta fino a un'ulteriore analisi.

Che tipi di analisi possono essere eseguite sulle cellule isolate?

Le cellule isolate possono essere utilizzate per analisi genomiche, proteomiche e altre analisi molecolari per comprendere le loro proprietà e comportamenti.

Campionamento di singole cellule mediante micromanipolazione: una tecnica per isolare singole cellule dalla sospensione di cellule tumorali

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

0 views • 2:10 min • April 30th, 2023

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Il campionamento di singole cellule consente di isolare una singola cellula viva da una sospensione di cellule tumorali per l'analisi a valle.

Inizia l'isolamento con una sospensione di cellule tumorali. Trasferire il volume desiderato di questa sospensione su un vetrino. Lasciare il vetrino indisturbato per un po' per ridurre il movimento delle particelle e consentire alle cellule di depositarsi.

A questo punto, trasferire il vetrino al microscopio dotato di un micromanipolatore collegato a una punta microcapillare. Questo strumento ad alta precisione facilita l'interazione fisica con le cellule del campione a livello microscopico.

Dirigere la punta microcapillare vicino a una singola cellula bersaglio. Applicando l'aspirazione, raccogliere la cellula bersaglio nel microcapillare. A questo punto, trasferire il microcapillare direttamente in una provetta contenente il tampone di raccolta desiderato.

Espellere il contenuto microcapillare per rilasciare la singola cellula catturata nel tampone. Conservare la singola cellula viva isolata su ghiaccio fino a ulteriori analisi.

Per la micromanipolazione, trasferire tutti i 100 microlitri di sospensione cellulare su un vetrino. Quindi, posizionare il vetrino su un microscopio dotato di micromanipolatore e lasciare che le cellule si depositino per 5 minuti. Quindi, in provette PCR da 0,2 millilitri, pipettare 2 microlitri di lisi cellulare master e trasferire su ghiaccio. Utilizzare il micromanipolatore per raccogliere una singola cellula in 1 microlitro di soluzione salina tamponata con fosfato 1X.

Quindi, trasferire la cellula direttamente in 2 microlitri di miscela master di lisi cellulare. Utilizzare un microfuge da tavolo per centrifugare rapidamente i campioni a 2000 x g per 3 secondi per raccogliere il liquido sul fondo della provetta.