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0 visualizzazioni • 2:10 min • April 30th, 2023
Il campionamento di singole cellule consente di isolare una singola cellula viva da una sospensione di cellule tumorali per l'analisi a valle.
Inizia l'isolamento con una sospensione di cellule tumorali. Trasferire il volume desiderato di questa sospensione su un vetrino. Lasciare il vetrino indisturbato per un po' per ridurre il movimento delle particelle e consentire alle cellule di depositarsi.
A questo punto, trasferire il vetrino al microscopio dotato di un micromanipolatore collegato a una punta microcapillare. Questo strumento ad alta precisione facilita l'interazione fisica con le cellule del campione a livello microscopico.
Dirigere la punta microcapillare vicino a una singola cellula bersaglio. Applicando l'aspirazione, raccogliere la cellula bersaglio nel microcapillare. A questo punto, trasferire il microcapillare direttamente in una provetta contenente il tampone di raccolta desiderato.
Espellere il contenuto microcapillare per rilasciare la singola cellula catturata nel tampone. Conservare la singola cellula viva isolata su ghiaccio fino a ulteriori analisi.
Per la micromanipolazione, trasferire tutti i 100 microlitri di sospensione cellulare su un vetrino. Quindi, posizionare il vetrino su un microscopio dotato di micromanipolatore e lasciare che le cellule si depositino per 5 minuti. Quindi, in provette PCR da 0,2 millilitri, pipettare 2 microlitri di lisi cellulare master e trasferire su ghiaccio. Utilizzare il micromanipolatore per raccogliere una singola cellula in 1 microlitro di soluzione salina tamponata con fosfato 1X.
Quindi, trasferire la cellula direttamente in 2 microlitri di miscela master di lisi cellulare. Utilizzare un microfuge da tavolo per centrifugare rapidamente i campioni a 2000 x g per 3 secondi per raccogliere il liquido sul fondo della provetta.
In questo articolo viene illustrata una tecnica precisa per isolare singole cellule da una sospensione cellulare eterogenea, consentendo analisi successive a livello di singola cellula. Il protocollo utilizza un micromanipolatore e un sistema di microcapillari per selezionare e trasferire fisicamente singole cellule vive destinate a ulteriori caratterizzazioni genomiche o molecolari.
La micromanipolazione a livello di singola cellula consente l'isolamento preciso di cellule tumorali individuali, supportando analisi molecolari a valle ad alta risoluzione. Questa capacità è fondamentale per decostruire l'eterogeneità cellulare e aumentare la fiducia predittiva nelle fasi iniziali della ricerca scoperta e traslazionale. L'integrazione di un isolamento così preciso nei flussi di lavoro di R&S migliora la validazione degli obiettivi e le decisioni di portafoglio corrette rispetto al rischio.
Questa tecnica di micromanipolazione si colloca all'interfaccia tra la fase iniziale della scoperta e la ricerca preclinica, consentendo l'analisi di singole cellule da sospensioni cellulari tumorali eterogenee.
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Ultimo aggiornamento: 29 agosto 2026