Pretrattamento tissutale FFPE per RNA CISH: una procedura per elaborare sezioni di tessuto incluse in paraffina fissate in formalina per l'ibridazione in situ cromogenica a RNA

Il pretrattamento di sezioni di tessuto fissate in formalina, incluse in paraffina o FFPE facilita l'esposizione degli acidi nucleici e consente il legame delle sonde marcate alla sequenza target durante la successiva ibridazione in situ. Inoltre, il pretrattamento aiuta a mantenere l'integrità degli acidi nucleici all'interno delle cellule e la morfologia complessiva dei tessuti.

Per iniziare, prendi un vetrino che trasporta una sezione di tessuto FFPE deparaffinizzata e reidratata di interesse. Trattare il tessuto con un'adeguata concentrazione di perossido di idrogeno e incubare.

Il perossido di idrogeno inattiva irreversibilmente la perossidasi endogena, che è fisiologicamente presente nelle cellule. Questo processo di blocco elimina la possibilità di segnali di fondo non specifici durante le successive fasi di ibridazione.

Successivamente, immergere la sezione di tessuto in un bagno riscaldato contenente un tampone di recupero dell'antigene appropriato. Incubare per la durata desiderata. L'alta temperatura scinde i legami incrociati chimici indotti dal fissativo nelle proteine e negli acidi nucleici, esponendo gli epitopi non mascherati alle sonde durante la successiva marcatu