JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 5:03 min. • July 8th, 2025
La colorazione fluorescente con argento delle proteine in gel di poliacrilammide impiega sonde fluorogeniche per rilevare e quantificare le proteine.
Inizia con un gel di poliacrilammide con proteine, separate in bande attraverso l'elettroforesi. Immergere in una miscela fissativa di etanolo e acido acetico, che impedisce alle bande di diffondersi denaturando le proteine.
Lavare il gel per rimuovere i residui di acido acetico ed etanolo. Immergere il gel nella macchia di nitrato d'argento. Gli ioni d'argento si legano fortemente ai gruppi caricati negativamente nelle proteine.
Incubare al buio. Sciacquare il gel in acqua ultrapura per rimuovere i complessi di ioni d'argento non legati.
Immergere il gel in una soluzione di sviluppo contenente una sonda fluorogenica multicomponente - TPE-4TA. Questa sonda anionica prende di mira gli ioni d'argento legati alla proteina, formando aggregati insolubili che attivano le proprietà fluorogeniche della sonda, conferendo così fluorescenza.
Poiché l'attivazione della fluorescenza dipende dall'aggregazione, le sonde non legate non emettono alcun segnale, consentendo la colorazione totale delle proteine con ridotta emissione di fondo.
Incubare il
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