JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:02 min. • July 8th, 2025
Le interazioni proteina-proteina sono cruciali per le funzioni cellulari vitali.
Per studiare le interazioni tra le proteine transmembrana, proteine di membrana che attraversano il doppio strato lipidico della membrana cellulare, iniziare con i pozzetti di una piastra multi-pozzetto contenente una coltura cellulare di mammifero aderente.
Quindi, aggiungere una soluzione contenente un agente di trasfezione adatto e una coppia di plasmidi di espressione.
Uno dei plasmidi di espressione codifica per una proteina transmembrana di interesse fusa al piccolo frammento non funzionale dell'enzima luciferasi; l'altro plasmide codifica per una seconda proteina transmembrana di interesse fusa al grande frammento non funzionale dell'enzima luciferasi.
Incubare la piastra. L'agente di trasfezione facilita l'assorbimento cellulare dei plasmidi di espressione.
Le cellule trasfettate con successo esprimono le proteine transmembrana. L'interazione tra le proteine transmembrana espresse porta i frammenti piccoli e grandi rivolti verso il citoplasma in stretta prossimità, facendoli legare e formare l'enzima luciferasi attivo.
Sostituire il terreno nei pozzetti con terreno privo di siero per ridurre al
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