Saggio di elettrochemiluminescenza per la quantificazione dei livelli di proteine bersaglio nel lisato cerebrale

Per la rilevazione quantitativa di una proteina specifica nel lisato cerebrale di topo utilizzando l'elettrochemiluminescenza, ECL, immunodosaggio, iniziare con una piastra di saggio multipozzetto.

I pozzetti comprendono elettrodi conduttori di lavoro e controelettrodi, completando il circuito elettrico. Uno strato dielettrico separa gli elettrodi, migliorando la sensibilità del saggio.

Aggiungere ai pozzetti gli anticorpi monoclonali primari di topo contro la proteina bersaglio. Gli elettrodi di lavoro, con maggiore capacità di legame, facilitano l'immobilizzazione degli anticorpi su di essi.

Incubare con una soluzione contenente proteine, legandosi alle restanti superfici di legame del pozzetto, riducendo l'interferenza di fondo.

Aggiungere il lisato della frazione nucleare del cervello di topo. La proteina bersaglio nel lisato si lega specificamente agli anticorpi monoclonali.

Aggiungere anticorpi policlonali non marcati, riconoscendo e legandosi agli epitopi sulla proteina, che è legata agli anticorpi monoclonali primari sull'elettrodo. Aggiungere anticorpi secondari specifici marcati con il complesso di rutenio, legandosi agli anticorpi non marcati. Aggiungere un tampone adatt