Metodo basato su ELISA per analizzare le interazioni tra le proteine dell'esca e della preda

L'interazione fisica tra due partner proteici modula i meccanismi biologici a valle.

Per rilevare le interazioni proteina-proteina utilizzando il test di immunoassorbimento enzimatico, ELISA, prelevare una piastra di immunodosaggio multipozzetto. Aggiungere un tampone di rivestimento contenente una delle proteine interagenti – la proteina esca – e incubare. Le proteine dell'esca vengono adsorbite sulla superficie del pozzetto attraverso interazioni idrofobiche non specifiche.

Scartare la soluzione esaurita e lavare la piastra con un tampone per rimuovere le proteine non legate. Aggiungere una soluzione bloccante e incubare, consentendo alle molecole dell'agente bloccante della soluzione di bloccare i siti di legame non specifici sulla superficie del pozzetto.

Aggiungi il partner proteico interagente – la proteina della preda – etichettato con residui di istidina per una facile quantificazione. Incubare, consentendo alla proteina della preda di legarsi in modo specifico al suo partner interattivo: l'esca. Aggiungere una soluzione di anticorpi anti-istidina coniugati con enzimi perossidasi di rafano che si legano alla preda, formando un complesso esca-preda-anticorpo.

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