Quantificazione degli interferoni bioattivi di tipo I utilizzando un saggio reporter di fosfatasi alcalina alcalina embrionale secreta

Per quantificare gli interferoni bioattivi di tipo I, come l'interferone-alfa e l'interferone-beta, in un campione di prova, prelevare una piastra a più pozzetti contenente cellule reporter ingegnerizzate. Queste cellule esprimono il gene reporter della fosfatasi alcalina embrionale secreta, SEAP, sotto il controllo del promotore inducibile dall'interferone-alfa e beta.

Aggiungere il campione di prova contenente una concentrazione di interferone di tipo I sconosciuta. Pipettare una serie di concentrazioni di interferone umano di tipo I in altri pozzetti, che fungono da controlli standard. Incubare.

L'interferone di tipo I nel pozzetto del test si lega a uno specifico recettore della superficie cellulare, attivando le Janus chinasi. Queste protein chinasi fosforilano i trasduttori di segnale e gli attivatori della trascrizione, STAT, proteine, che dimerizzano e formano un complesso con uno specifico fattore di regolazione dell'interferone.

Entrando nel nucleo, il complesso si lega a una specifica sequenza di DNA nel promotore inducibile dell'interferone-alfa e beta, attivando la trascrizione genica SEAP e producendo gli enzimi SEAP, che vengono secreti nel terreno.

Trasferire il ter