JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:31 min. • July 8th, 2025
Inizia con una piastra di coltura contenente criosezioni di digiuno di topo fissate in formalina e riempite di gelatina con cellule a ciuffo con microvilli apicali e soma a forma di bobina.
Lavare con un tampone contenente detersivo per permeabilizzare le membrane cellulari.
Aggiungere una soluzione alcalina per il recupero dell'antigene. Incubare per rompere i legami incrociati delle proteine indotte dalla fissazione, rivelando le proteine per la colorazione.
Applicare una soluzione bloccante per prevenire il legame non specifico degli anticorpi.
Sovrapposizione con anticorpi primari che hanno come bersaglio una proteina legante l'actina, specificamente fosforilata nelle cellule del ciuffo.
Rimuovere gli anticorpi non legati. Introdurre un mix di anticorpi secondari coniugati con fluorofori, colorante legante il DNA e coniugato colorante fluorescente falloidina.
Gli anticorpi secondari si legano agli anticorpi primari, il colorante falloidina-fluorescente coniuga l'actina e il colorante legante il DNA marca i nuclei cellulari.
Rimuovere i componenti non legati e aggiungere un tampone privo di detergenti.
Trasferire la sezione su un vetrino rivestito di adesivo, montandolo con i su
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