Una tecnologia di microarray peptidici per la profilazione della specificità degli anticorpi

Prendi un vetrino di microarray contenente peptidi istonici con modifiche post-traduzionali o PTM target e non target.

I peptidi vengono immobilizzati tramite biotina coniugata in punti specifici del vetrino funzionalizzato con streptavidina.

Le macchie contengono anche un fluoroforo verde immobilizzato coniugato con biotina, che facilita l'identificazione delle macchie.

Introdurre un tampone bloccante, prevenendo l'interazione anticorpale non specifica.

Rimuovere il tampone e centrifugare per asciugare il vetrino.

All'interno di un imprinter per cera, bordare l'array con cera.

Equilibrare l'array con un buffer di ibridazione.

Incubare con gli anticorpi primari specifici per un PTM bersaglio.

Introdurre anticorpi secondari rossi coniugati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari.

Rimuovere gli anticorpi non legati e centrifugare per asciugare il vetrino.

Immagine del vetrino utilizzando uno scanner per microarray. La fluorescenza verde aiuta a identificare le macchie, mentre la fluorescenza rossa indica l'interazione PTM-anticorpo, dimostrando la specificità anticorpale.

Il riconoscimento del PTM target dimostra la specificità anticorpale, mentre il riconoscimento di PTM