Rilevazione quantitativa multiplexata di batteri mediante microsfere magnetiche marcate con colorante

Prelevare una piastra di analisi contenente una miscela di microsfere di polistirene magnetico tinte internamente con fluorofori spettralmente diversi.

Ogni set di microsfere è accoppiato in modo covalente a distinti anticorpi di cattura specifici per batteri patogeni.

Aggiungere una miscela batterica patogena uccisa dal calore. Incubare.

Gli anticorpi di cattura legano gli antigeni batterici bersaglio, formando complessi microsfera-batteri.

Utilizzare un separatore magnetico per depositare i complessi. Eliminare i batteri non legati e lavare con il tampone.

Aggiungere tampone e anticorpi di rilevamento biotinilati, che si legano specificamente ai batteri legati alle microsfere.

Separare magneticamente i complessi e lavare con tampone.

Risospendere i complessi nel buffer. Pipettare molecole reporter comprendenti streptavidina accoppiata a fluoroforo, che si legano agli anticorpi di rilevamento biotinilati.

Separare e lavare magneticamente i complessi. Risospensione nel buffer.

Durante l'analisi basata sul flusso, il primo laser eccita i fluorofori interni della microsfera, generando firme spettrali uniche e identificando set di microsfere unici.

Il secondo laser eccita i reporter f