Purificazione di nanoparticelle proteiche autoassemblanti mediante cromatografia di affinità

Prendi una sospensione di batteri ingegnerizzati che esprimono nanoparticelle proteiche ricombinanti autoassemblanti con tag poliistidinici.

Sonicare per rilasciare componenti intracellulari.

Centrifuga per raccogliere il surnatante contenente nanoparticelle proteiche. Diluirlo con un tampone privo di imidazolo.

Prelevare una colonna per cromatografia di affinità contenente perle di agarosio con cationi di nichel immobilizzati.

Aggiungere un tampone con una bassa concentrazione di imidazolo per l'equilibrio della colonna.

Aggiungere il lisato batterico sulla colonna.

Durante la corsa, la poliistidina sulle nanoparticelle proteiche si lega fortemente con i cationi di nichel.

Nel frattempo, contaminanti come i lipopolisaccaridi batterici e altre proteine si legano debolmente alla colonna.

Lavare con un tampone contenente una bassa concentrazione di imidazolo per rimuovere le proteine debolmente legate.

Introdurre l'isopropanolo per rimuovere i lipopolisaccaridi e poi lavare.

Successivamente, introdurre un tampone con una concentrazione intermedia di imidazolo. L'imidazolo compete con l'istidina per legarsi al catione nichel, rilasciando nanoparticelle proteiche legate.

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