Imaging e quantificazione di aggregati proteici in cervelli di Drosophila geneticamente modificati
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:47 min. • July 8th, 2025
Inizia con i cervelli di Drosophila geneticamente modificati. Questi cervelli esprimono una proteina mutante marcata con fluorescenza rossa nel neurone che può diffondersi alla cellula gliale circostante, esprimendo la proteina normale marcata con fluorescenza gialla, causando la loro aggregazione.
Aggiungere una soluzione fissativa che preservi l'integrità cellulare.
Rimuovere il fissativo e lavare con un tampone.
Aggiungere un reagente anti-dissolvenza e incubare per evitare lo sbiadimento dei segnali fluorescenti.
Trasferire le cervella su un vetrino e rimuovere il liquido in eccesso.
Lascia che il cervello aderisca al vetrino.
Usando piccoli pezzi di un vetrino coprioggetti come distanziatori, posiziona un vetrino coprioggetti sopra di essi. Aggiungere il reagente antisbiadimento e sigillarlo.
Con un microscopio confocale, acquisisci immagini utilizzando diverse lunghezze d'onda di eccitazione per la fluorescenza rossa e gialla.
Utilizzando un software di analisi delle immagini, quantificare gli aggregati proteici.
La co-localizzazione della fluorescenza rossa e gialla indica la diffusione di proteine mutanti.
Una volta che tutti i cervelli sono stati sezionati, trasferire la p
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