Analisi della dinamica del calcio e delle variazioni del potenziale di membrana in un endotelio arteriolare di topo

Fissare un tubo endoteliale arteriolare prelevato dal cervello di un topo in una camera con un flusso tampone continuo.

Posizionare la camera in una configurazione di registrazione.

Introdurre un colorante fluorescente sensibile al calcio. Incubare per consentire l'assorbimento cellulare del colorante.

Lavare per rimuovere eventuali coloranti non internalizzati.

Inserire un elettrodo in una cellula endoteliale e registrare il potenziale di membrana a riposo.

Aumentare la temperatura del bagno a una temperatura fisiologica per facilitare il legame intracellulare del calcio al colorante.

Eccitare il colorante e misurare la fluorescenza per quantificare i livelli di calcio cellulare di base.

Introdurre un farmaco che si lega a specifici recettori accoppiati a proteine G sulle cellule endoteliali, avviando una cascata di segnalazione.

Questa cascata rilascia ioni calcio dal reticolo endoplasmatico nel citoplasma, migliorando il legame calcio-colorante e la fluorescenza.

Elevati livelli citoplasmatici di calcio attivano anche i canali del potassio, facilitando l'efflusso di ioni potassio e diminuendo il potenziale di membrana.

Registrare i dati.

L'aumento della fluorescenza e la diminuzione del p