JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:53 min. • April 28th, 2025
Prendete una sezione di cervello di topo fissata con tetrossido di osmio incorporata in un blocco di resina.
Ottenere un'immagine di sezione e allinearla con un'immagine dell'atlante pre-preparata per identificare la regione di interesse.
Segna i confini di questa regione sul blocco.
Riscaldare la resina per ammorbidirla e asportare la regione contrassegnata.
Incollare il campione su una barra di supporto del vetro e tagliarlo.
Utilizzando un ultramicrotomo, preparare sezioni semisottili e ultrasottili.
Trasferire le sezioni semisottili e ultrasottili rispettivamente su supporti di vetro e griglie di nichel.
Colorare le sezioni semisottili con un colorante che si lega agli acidi nucleici, al citoplasma ricco di ribosomi e alla matrice extracellulare.
Lavare le sezioni ed esaminarle al microscopio ottico per confermare la presenza dell'area target.
Osservare le sezioni ultrasottili al microscopio elettronico a trasmissione.
Il tetrossido di osmio migliora la densità elettronica delle membrane cellulari e degli organelli, fornendo un elevato contrasto contro il citoplasma meno denso di elettroni, consentendo la visualizzazione dell'ultrastruttura cellulare.
Per mappare un'area di interesse, se
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