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DOI: 10.3791/3442-v
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Descriviamo un metodo per identificare i regolatori sensibilizzati postembrionale di espressione proteica e la localizzazione in
L'obiettivo di questa procedura è quello di identificare regolatori post-embrionali dell'espressione e della localizzazione proteica in C elegance utilizzando uno screening genomico basato su RNAi e proteine marcate in fluorescenza. Una volta costruito il ceppo di screening appropriato, viene scelta una libreria di RNAi. Il primo passo della procedura consiste nel confezionare i cloni della libreria in batteri.
I batteri vengono quindi selezionati, cresciuti e nutriti con nematodi c elegance in stadi. Dopo aver lasciato crescere i nematodi per 72 ore, vengono osservati per alterazioni del fenotipo di interesse. Infine, i cambiamenti nell'espressione o nella localizzazione subcellulare della proteina attaccata vengono visualizzati con la microscopia a fluorescenza.
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