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DOI: 10.3791/4350-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Qui, presentiamo un metodo per l'interruttore fotoattivato di proteine fluorescenti fotoconvertibili (PCFP) nell'embrione vivente di pesce zebra e un ulteriore monitoraggio della proteina fotoconvertita in punti temporali specifici durante lo sviluppo. Questa metodologia consente il monitoraggio degli eventi biologici cellulari alla base di diversi processi di sviluppo in un organismo vertebrato vivo.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di tracciare le cellule fotocommutate in un embrione di pesce zebra vivente. Ciò si ottiene incorporando prima un embrione, esprimendo una proteina fluorescente convertibile fotospecifica del tessuto in aros a bassa temperatura di fusione. Successivamente, la proteina all'interno della regione di interesse viene completamente fotoconvertita.
Quindi l'embrione viene accuratamente rimosso dall'aros e mantenuto in acqua d'uovo a 28,5 gradi Celsius fino alle fasi successive. Infine, l'embrione fotoconvertito viene nuovamente incorporato in aros a bassa temperatura di fusione. In definitiva, si possono ottenere risultati che dimostrano che le cellule fotoconvertite possono essere rilevate con precisione nelle fasi successive grazie alla presenza stabile della proteina fotoconvertita attraverso la microscopia confocale.
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