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JoVE Journal Bioengineering
Characterization of Complex Systems Using the Design of Experiments Approach: Transient Protein Expression in Tobacco as a Case Study

Caratterizzazione dei sistemi complessi Utilizzando il Design of Experiments Approccio: Transient Protein Expression in tabacco come un caso di studio

Full Text
17,188 Views
20:24 min
January 31, 2014

DOI: 10.3791/51216-v

Johannes Felix Buyel1, Rainer Fischer1,2

1Institute for Molecular Biotechnology,RWTH Aachen University, 2Institute for Molecular Biology and Applied Ecology,Fraunhofer Gesellschaft

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Descriviamo un disegno di esperimenti approccio che può essere utilizzato per determinare e modellare l'influenza del transgene elementi regolatori, parametri di crescita e sviluppo delle piante, e condizioni di incubazione sulla espressione transiente di anticorpi monoclonali e proteine ​​reporter nelle piante.

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di generare modelli predittivi per l'espressione transitoria di proteine nelle foglie delle piante. Ciò si ottiene mettendo a punto un disegno sperimentale per identificare i parametri più importanti per l'espressione transitoria e quantificare il loro impatto sull'accumulo di proteine. In una seconda fase, i geni vengono clonati e trasferiti in agrobatteri, che vengono poi iniettati nelle foglie con conseguente espressione proteica transitoria.

I campioni di foglie successive vengono analizzati per determinare i livelli di espressione proteica. Si ottengono risultati che mostrano il pattern dei livelli di espressione proteica transitoria in foglie di diverse età e per diverse condizioni di incubazione sulla base di un disegno di valutazione del modello sperimentale. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come un fattore alla volta, è che le interazioni tra diversi parametri come l'età delle foglie o la posizione delle foglie possono essere rilevate e quantificate.

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