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DOI: 10.3791/51544-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Ratiometric beacon bimolecolari (RBMBs) possono essere utilizzati per immagini singole trascritti di RNA ingegnerizzati in cellule viventi. Qui, descriviamo la preparazione e purificazione di RBMBs, consegna delle RBMBs in cellule di microporation e l'imaging fluorescente di trascritti di RNA singoli in tempo reale.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di visualizzare in tempo reale singoli trascritti di RNA in cellule viventi. Ciò si ottiene ibridando prima due oligonucleotidi che sono stati progettati per formare una sonda a forcina nota come metrica del rapporto per faro molecolare. Il secondo passo consiste nel purificare la metrica del rapporto mediante beacon molecolari mediante cromatografia ad esclusione dimensionale.
Successivamente, la metrica del rapporto mediante fari molecolari viene introdotta nelle cellule che esprimono il bersaglio dell'RNA ingegnerizzato tramite micro porzione. Il passaggio finale consiste nel vedere le cellule in una piastra a micropozzetti adatta per la microscopia su cellule vive. In definitiva, la microscopia a fluorescenza viene utilizzata per monitorare i movimenti dei singoli trascritti di RNA visualizzati come punti fluorescenti luminosi all'interno di singole cellule.
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