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In tempo reale Imaging del singolo Engineered RNA trascritti in cellule viventi Utilizzando Ratio...
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JoVE Journal Biology
Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

In tempo reale Imaging del singolo Engineered RNA trascritti in cellule viventi Utilizzando Ratiometric bimolecolari Beacons

Full Text
12,238 Views
12:20 min
August 6, 2014

DOI: 10.3791/51544-v

Yang Song*1, Xuemei Zhang*1, Lingyan Huang2, Mark A. Behlke2, Andrew Tsourkas1

1Department of Bioengineering,University of Pennsylvania, 2Integrated DNA Technologies, Inc.

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Ratiometric beacon bimolecolari (RBMBs) possono essere utilizzati per immagini singole trascritti di RNA ingegnerizzati in cellule viventi. Qui, descriviamo la preparazione e purificazione di RBMBs, consegna delle RBMBs in cellule di microporation e l'imaging fluorescente di trascritti di RNA singoli in tempo reale.

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di visualizzare in tempo reale singoli trascritti di RNA in cellule viventi. Ciò si ottiene ibridando prima due oligonucleotidi che sono stati progettati per formare una sonda a forcina nota come metrica del rapporto per faro molecolare. Il secondo passo consiste nel purificare la metrica del rapporto mediante beacon molecolari mediante cromatografia ad esclusione dimensionale.

Successivamente, la metrica del rapporto mediante fari molecolari viene introdotta nelle cellule che esprimono il bersaglio dell'RNA ingegnerizzato tramite micro porzione. Il passaggio finale consiste nel vedere le cellule in una piastra a micropozzetti adatta per la microscopia su cellule vive. In definitiva, la microscopia a fluorescenza viene utilizzata per monitorare i movimenti dei singoli trascritti di RNA visualizzati come punti fluorescenti luminosi all'interno di singole cellule.

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