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DOI: 10.3791/52551-v
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Questo articolo video illustra un protocollo completo per rilevare e quantificare tutte le fasi della neurogenesi ippocampale adulta all'interno della stessa sezione di tessuto. Abbiamo elaborato un metodo per superare i limiti dell'immunofluorescenza multipla indiretta che si verificano quando non sono disponibili anticorpi adatti da diverse specie ospiti.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di aggirare i limiti dell'immunofluorescenza indiretta per studiare le cellule progenitrici neurali. Quando non sono disponibili anticorpi primari idonei di diverse specie ospiti. Inizialmente, viene iniettato un analogo della timidina per etichettare le cellule in divisione, dopodiché il tessuto viene raccolto, elaborato e tagliato in sezioni criogeniche.
Quindi viene eseguita l'immunofluorescenza multipla sequenziale per iniziare. Viene applicato un anticorpo primario non marcato, che viene poi legato da un anticorpo secondario marcato in fluorescenza. Successivamente, le pericopi aperte sul primo anticorpo secondario vengono bloccate con il siero della specie di anticorpo primario e tutte le immunoglobuline che potrebbero essere riconosciute dal secondo anticorpo secondario vengono ricoperte da frammenti fab non coniugati.
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