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DOI: 10.3791/52643-v
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This article describes a method for the quick, efficient, and inexpensive preparation of polyacrylamide gels in a multiwell plate format. The technique is accessible to any research laboratory and is particularly beneficial for studies on stiffness-dependent cell responses.
Qui viene descritto un metodo che consente una preparazione rapida, efficiente ed economica di gel di poliacrilammide in un formato di piastra multipozzetto. Il metodo non richiede alcuna attrezzatura specializzata e potrebbe essere facilmente adottato da qualsiasi laboratorio di ricerca. Sarebbe particolarmente utile nella ricerca incentrata sulla comprensione delle risposte cellulari dipendenti dalla rigidità.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di consentire una preparazione rapida, efficiente ed economica di gel di poliacrilammide in un formato di piastra a più pozzetti. Ciò si ottiene inserendo prima la soluzione precursore del gel tra una lastra di vetro rivestita idrofobica e un supporto in plastica flessibile adesiva acrilammidica. Il secondo passo consiste nel staccare il gel dalla lastra di vetro, che si è attaccata in modo covalente al supporto di plastica flessibile durante la polimerizzazione e lasciarlo asciugare.
Successivamente, il gel secco e il supporto di plastica flessibile sottostante vengono tagliati nelle forme desiderate e incollati con il lato di plastica rivolto verso il basso sul fondo di una piastra multipozzetto o di qualsiasi altro recipiente per colture cellulari. Il passaggio finale consiste nel rivestire i gel di poliacrilammide assemblati con piastra multipozzetto con un rivestimento adesivo cellulare, come un monostrato di collagene di tipo uno. In definitiva, la microscopia, così come altre tecniche di caratterizzazione cellulare, vengono utilizzate per osservare l'effetto del substrato di poliacrilammide sottostante.
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