Registrazione di EEG nei ratti neonatali liberamente in movimento utilizzando un metodo novello

Qui introduciamo una nuova tecnica per la registrazione dell'elettroencefalografia (EEG) nei cuccioli epilettici neonatali liberi e descrivere le sue procedure, le sue caratteristiche e le sue applicazioni. Questo metodo consente di registrare EEG per più di una settimana.

L'obiettivo generale di questo metodo è quello di registrare gli EEG da cuccioli di ratto neonatale che si muovono liberamente, utilizzando un nuovo elettrodo stabile per una settimana o più. Questo metodo avrà risposto a domande chiave nel campo delle neuroscienze e sarà utile nello studio dell'epilessia neonatale. Utilizzando questa tecnica, è possibile registrare segnali EEG stabili e di alta qualità per intervalli di tempo più lunghi.

Che aiuterà nella diagnosi di vari disturbi neuropatologici. In generale, gli individui che non conoscono questo metodo avranno difficoltà perché i ratti neonatali da p8 a p15 sono molto difficili da maneggiare e richiedono grande cura. L'elettrodo richiede un contatto a punta per funzionare come interfaccia di segnale con i dispositivi di comunicazione.

Un pin del computer lo sai ricopre questo ruolo. Separare con cura i pin maschio e femmina da un pin del computer utilizzando una pinza. Quindi, collegare i pin maschio e femmina insieme per formare un elettrodo e fissare il collegamento con cianoacrilato.

Realizza diversi di questi elettrodi. Una volta che i legami si sono induriti, mettere gli elettrodi in un becher riempito di acqua distillata per dieci minuti. Quindi, mettili in un pulitore a ultrasuoni per pulire gli elettrodi.

Quindi, trasferisci il bicchiere in un forno impostato a 45 gradi Celsius e scaldali per mezz'ora. Infine, sterilizzare gli elettrodi con un'esposizione UV di 30 minuti. In una cappa di biosicurezza, posizionare prima gli strumenti chirurgici sterilizzati e un apparato stereotassico sterilizzato per l'intervento chirurgico.

Quindi, anestetizzare il cucciolo di ratto neonatale usando isoflurano al due virgola cinque percento. Quando il cucciolo è profondamente anestetizzato, ridurre l'isoflurano all'uno percento. Prima di procedere, utilizzare un pizzico per le dita dei piedi per assicurarsi che il mouse sia sufficientemente anestetizzato.

Quindi, fissa la testa del cucciolo nell'apparato stereotassico. Posizionare le barre auricolari nei canali uditivi e serrare delicatamente le barre. Attenzione: il cranio neonatale è molto morbido.

Ora, fai un'incisione della linea mediana di quindici millimetri nel cranio. Quindi, con una pinza, separare delicatamente il cuoio capelluto per allargare l'incisione. Per mantenere aperta l'incisione, utilizzare un pezzo di cotone imbevuto di soluzione salina.

Ora individua il bregma e il lambda e segnali con una matita. Le seguenti fasi di impianto degli elettrodi sono fondamentali e devono essere eseguite con precisione. Per prima cosa, usando un ago calibro 26, fai un foro nella corteccia prefrontale, due millimetri anteriormente al bregma ed entro zero virgola cinque millimetri dalla linea mediana.

Quindi, fai un foro nell'ippocampo in un punto otto millimetri dietro la bregma e zero virgola cinque millimetri lateralmente della linea mediana. L'ago non deve penetrare più di due millimetri sotto la superficie corticale per ridurre al minimo il danno cerebrale. Ora, usando una pinza, inserisci l'elettrodo di riferimento nel foro della corteccia e inserisci gli elettrodi di registrazione nel foro dell'ippocampo.

Quindi, applicare un unguento all'eritromicina attorno agli elettrodi e fissare gli elettrodi in posizione con cianoacrilato. Mentre la colla si lega, preparare il cemento dentale con una consistenza collosa e viscosa. La viscosità del cemento dentale è fondamentale.

Se il cemento dentale è troppo sottile, può causare la formazione di uno strato isolante indesiderato sotto l'elettrodo. Se il cemento è troppo denso, gli elettrodi si staccheranno più facilmente a causa della massa in eccesso. Prima di applicare il cemento, asciugare accuratamente il cranio e gli elettrodi.

Quindi, fissare gli elettrodi al cranio con cemento dentale. Successivamente, applicare un po' di acido picrico sugli elettrodi per aggiungere un altro strato di protezione. Ora, rimuovi l'animale dal telaio stereotassico e inietta 300 microlitri di soluzione di glucosio al dieci percento per via sottocutanea.

Quindi, trasferisci l'animale in una coperta riscaldata per mantenerlo a 37 gradi Celsius fino a quando non sarà deambulante. Una volta ambulatoriale, somministrare buprenorfina per mediare il dolore post-chirurgico e trasferire il cucciolo nella sua gabbia di casa con la sua madre. Prima di utilizzare l'impianto, attendere almeno due giorni affinché il cucciolo si riprenda.

Dopo il periodo di recupero, ospita il cucciolo da solo per effettuare registrazioni per una decina di minuti in modo che il cucciolo possa familiarizzare con l'ambiente. Collegare gli elettrodi a un amplificatore e collegare l'amplificatore a un convertitore AD collegato a un computer. Fare attenzione a non aggrovigliare queste connessioni.

Successivamente, sull'unità di acquisizione dati, selezionare una frequenza di campionamento di almeno 10.000 hertz per la registrazione e verificare la corretta trasmissione dei dati. Raccogli una registrazione di base. Dopo aver effettuato una registrazione di base, iniettare il cucciolo per via intraperitoneale con acido kainico per indurre crisi epilettiche.

Quindici minuti dopo l'iniezione, osservare e registrare le secrezioni epilettiche. Salva i dati digitalizzati e analizzali utilizzando un software di elaborazione del segnale. Rivela il livello di potenza di diverse componenti di frequenza negli EEG neonatali utilizzando l'analisi dello spettro di potenza.

Calcola la potenza da intervalli di tempo di un minuto trovando l'ampiezza quadratica media da uno a cento hertz, che è la banda EEG. Dieci minuti dopo l'iniezione di acido kainico, sono stati registrati modelli di scarica EEG interictale e ictale ricorrenti. Le convulsioni più comuni registrate sono state di tipo tonico clonico.

La durata del tonico ictale è durata circa quindici secondi. È stato anche osservato che le scariche toniche erano seguite da esplosioni cloniche. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come impiantare gli elettrodi e ottenere registrazioni EEG di alta qualità da cuccioli di ratto neonatale p8 a p15.

Una volta arruolato, l'impianto cervicale può essere effettuato in meno di dieci minuti a seconda della complessità dell'intervento.