Isolamento di proteine ​​filamentose intermedie da tessuti multipli di topo per studiare modificazioni post-traduzionali associate all'invecchiamento

L'obiettivo generale di questa procedura biochimica è isolare frazioni arricchite di filamenti intermedi da più tessuti di topo al fine di studiare le modificazioni post-traduzionali delle diverse proteine dei filamenti intermedi specifici del tessuto. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo dei filamenti intermedi, come ad esempio come la funzione e la regolazione di queste importanti proteine del citoscheletro protettive dallo stress siano influenzate durante l'invecchiamento dei mammiferi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'incorporazione di una fase di lisi tissutale automatizzata consente agli utenti di elaborare più campioni di tessuto in modo rapido ed efficiente.

Per iniziare, aggiungere un millilitro di tampone Triton X-100 ghiacciato integrato con inibitori della proteasi in un omogeneizzatore in provette di vetro e metterlo sul ghiaccio. Rimuovere un piccolo pezzo di tessuto dal deposito di azoto liquido e metterlo direttamente nell'omogeneizzatore di vetro. Quindi, mantenendo l'omogeneizzatore e il campione sempre in ghiaccio, utilizzare circa 50 colpi di una pastiglia di politetrafluoroetilene per omogeneizzare il campione riducendo al minimo la formazione di bolle.