Cella singola quantificazione del mRNA e l'espressione di proteine di superficie CD4 infettati da Virus di immunodeficienza delle scimmie+ T cellule isolate da macachi Rhesus

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo delle interazioni ospite-patogeno come quali sono le caratteristiche uniche delle cellule infette produttivamente, quali cofattori ospiti consentono ai virus di stabilire un'infezione produttiva e come indirizzare queste cellule negli interventi terapeutici. Il principale vantaggio di questa tecnica è che fornisce misure quantitative sia per le proteine che per l'mRNA all'interno di singole cellule, e la maggior parte dei reagenti sono disponibili in commercio. A dimostrare la procedura di smistamento delle cellule sarà Matthew Creegan, un tecnico senior del nucleo di citometria a flusso nel laboratorio del dottor Michael Eller.

Per iniziare, in una workstation di biologia molecolare pre-PCR designata, preparare il mix di test combinando 96 test di espressione genica in un tubo libero di RNasi, DNasi assicurandosi di aggiungere ogni saggio a una concentrazione finale di 180 nanomolari di primer avanti e indietro. Aggiungere il tampone di sospensione del DNA per ottenere l'appropriata diluizione della miscela di test. Per ogni array di chip 96 per 96 previsto, pipettare sei microlitri di ogni saggio in un pozzo designato di una piastra PCR da 96 po ', quindi sigillare la piastra con un adesivo.