Quantificazione delle cellule CD4 specifiche dell'antigene umano che proliferano utilizzando Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Questo protocollo fornisce una piattaforma per lo studio delle risposte delle celle CD4T che sono spesso deboli e difficili da rilevare. Questa tecnica consente il rilevamento, l'enumerazione e l'isolamento delle celle CD4T senza alcuna conoscenza preliminare della presentazione dell'antigene. Il vantaggio principale è l'analisi delle cellule CD4T che sono abbastanza spesso popolazioni rare associate a condizioni autoimmuni come il diabete di tipo uno.

Dopo aver ottenuto il campione di sangue periferico da un donatore sano, diluire il sangue in PBS in almeno uno o due rapporti prima di stratificazione di 35 millilitri di sangue oltre 15 millilitri di mezzo gradiente di densità in un tubo da 50 millilitri. Separare le cellule per centrifugazione del gradiente di densità e rimuovere circa 20 millilitri dello strato plasmatico superiore risultante. Quindi raccogliere lo strato di globuli bianchi facendo attenzione ad evitare il pellet di globuli rossi e lavare le cellule tre volte in PBS fresco.